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摘 要
CDF蛋白家族是最近发现的一个阳离子转运蛋白家族,在维持金
属动态平衡和耐受方面起很重要的作用。拟南芥基因组测序完成后,
序列分析表明拟南芥cDF家族至少由12个成员构成,命名为
爿埘即卜蜴本研究克隆彳删7阳并初步鉴定其功能。彳删7阳位于第
二条染色体上,编码一个含有47laa的蛋白质,结构分析表明其具有
cDF家族的一些共同特征,如c端有一个cE功能域、N端有一段信号
序列,但与已鉴定的成员不同的是它只含有五个跨膜区。本研究包括
克隆、鉴定生化及生理功能、描述亚细胞定位,并取得了以下结果:
1.通过RT—PcR克隆爿删7m测序结果显示其序列与AGI预测
的序列完全一致。将彳埘7阳基因的cDNA构建至原核表达载体
pTrc99A,重组载体转化大肠杆菌突变株KAM3,平板上的结果表明,
此基因的表达使细菌对Zn”、EtBr更加敏感。
2.通过与绿色荧光蛋白(GFP)融合,在共聚焦显微镜下显示此
蛋白定位于细胞器上,此结果与在线软件PsORT的预测结果比较一
致,且预测AtMTP6很有可能定位于线粒体膜上。
3.为了研究爿洲7阳的生理功能,过表达彳£彤7阳的转基因拟南
芥、互补转基因拟南芥、纯合T—DNA敲除突变体和野生型四种材料同
时在正常或胁迫的平板上进行表型观察,结果显示:过表达植株对
引起线粒体内EtBr的积累从而对细胞造成损害;四种材料生长于含
不同浓度zn2+的平板上时没发现什么表型;过表达植物的种子种皮颜
色较浅且尺寸较小,可见AtMTP6可能与色素转运有关;在含有甘露
醇的高渗平板上,过表达植物种子的萌发很明显被抑制,可见AtMTP6
与渗透胁迫有关;在正常生长条件下,过表达植物开花要明显早于其
它三个材料,表明AtMTP6可能参与调控或确定植物的开花时间。
关键词:AtMTP6,CDF家族,拟南芥,突变体
ABSTRACT
Cationdiffusion arearecently
facilitator(CDF)proteins
Llx that
discoveredofcationeffl play
family transportersmight
tasisandtolerance.After
anessentialr01einmetalhomeos
nolessthan12 ofCDF
Arabidopsissequencing, genes
genomic
andnamed彳£∥7)吖一』2This cloned
familyareidentified study
爿硝7阳
characterizedthefunction.
爿南Ⅳ7)D疗andprimarily
locatesonthesecondchromosonIe a471aa
encoding protein+
revealsthis hasthe CDF
Structural general
analysis protein
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