16生物化学实验醋酸纤维薄膜电泳法分离血清乳酸脱氢酶同工酶.docVIP

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清乳酸脱氢酶同工酶 【目的】 1 ． 掌握电泳法分离血清乳酸脱氢酶同工酶的原理与技术。 2 ． 熟悉测定血清乳酸脱氢酶同工酶的临床意义。 【原理】 体内 LDH 同工酶均由四个亚基组成。亚基分二种，即 “ H ” 亚基（多分布于心肌）与 “ M ” 亚基（多分布于肌肉）。根据亚基不同， LDH 同工酶分为以下五种（表 3-8 ）。 表 3-8 LDH 同工酶的分类与组成 分类 亚基组成 LDH 1 LDH 2 LDH 3 LDH 4 LDH 6 H H H H(H 4 ) H H H M(H 3 M ) H H M M(H 2 M 2 ) H M M M(HM 3 ) M M M M(M 4 ) 由于 LDH 同工酶的亚基组成不同，在 pH8.6 巴比妥缓冲液中所带电荷不同，通过醋酸纤维薄膜电泳可以将血清样品中的各种 LDH 同工酶彼此分开。 以乳酸钠（钾）为基质，在有氧化型辅酶 Ⅰ 存在时， LDH 可是乳酸脱氢生成丙酮酸、使 NAD + 还原为 NADH+H + ， NADH+H + 又将氢传递给吩嗪二甲酯硫酸盐（ PMS ）， PMS 再将氢传递给氯化硝基四氮唑蓝（ NBT) ，使其还原为紫蓝色化合物，因此有 LDH 活性的区带即着紫色，生成颜色深浅与 LDH 活性成正比。其反应如下： 将电泳后的 醋酸纤维