根癌农杆菌介导大花蕙兰遗传转化的研究.pdfVIP

西北植物学报 ，2O11，31(1)：0027—0032 ActaBOt．Borea1．-Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2011)01—0027—06 根癌农杆菌介导大花蕙兰遗传转化的研究 王 微，杨晓伶 ，杨 婧，程 舟，朱云 国，李 珊 (同济大学 生命科学与技术学院，上海 200092) 摘 要：以大花蕙兰原球茎(PIBs)为外植体，采用 EHA105和 LBA44042种根癌农杆菌菌株与pCAMBIA1301质 粒构建工程菌介导，以建立大花蕙兰遗传转化体系，并比较不同受体处理方式、菌液浓度和侵染方式等对大花蕙兰 转化 的影响。结果表 明：(1)以切成 3mm左右的PIBs小块作为受体材料 ，用 ODsoo值为 0．6的LBA4404根癌农 杆菌菌株 ，并用 Ms+1．0mg／IBA+200 mol／LAS(乙酰丁香酮)的液体培养基将菌液等体积稀释侵染，转化率 可达62．5 。(2)大花蕙兰对潮霉素(Hyg)十分敏感 ，5mg／LHyg对转化后 的PLBs有较好 的筛选效果，筛选后最 高成活率为 13．0 。(3)PCR检测初步证明，通过根癌农杆菌介导的方法获得 了2株转基因大花蕙兰植株 。 关键词 ：大花蕙兰；根癌农杆菌；遗传转化；类原球茎 中图分类号：Q789 文献标志码 ：A StudyonAgrobacteriumtumefaciens。mediated Transformation ofCymbidium hybridum WANGWei，YANG Xiao—ling ，YANG Jing，CHENG Zhou，ZHU Yun—guo，LIShan (SchoolofLifeScienceandTechnology，TongjiUniversity，Shanghai200092，China) Abstract：A transformationsystem ofCymbidiumhybridum PIBs(protocorm—likebodies)wasestablished withAgrobacterium tumefaciensstrainsEHA105and LBA4404thatharboredbinary plasmidvector DCAMBIA 1301．The effectsofdifferentreceptortreatments，thebacterialconcentrationsand infection methodsonthetransformationefficiencyofC．hybridum PLBswerecompared．Theresultsshowedthatef— ficienttransformationcouldbegottenwith 3mm PIBsblocksasreceptor．Highertransformationratewas gainedwhentheOD600ofLBA4404wasabout0．6andbacteriawasdilutedwithequivalentvolumeofMS+ 1．0mg／I6一BA+200 “mol／LASliquidmedium．Thehighesttransformationratewas62．5 ．C．hybridum wasverysensitivetohygromycin (Hyg)．Thebetterselectivesurvivalrateof13．0 wasgottenwhenthe concentrationofHygwas5mg／I．SuccessfullytransformedC．hybridum PIBswereconfirmedbyPCRa— nalysis． Key words：Cymbidium hybridum ；Agrobacterium tumefaciens；genetictransformation；protocorm—like bodies(PIBs) 大花蕙兰 (Cymbidiumhybridum)为兰属常绿 数市售大花蕙兰依靠从 日本 、韩国等国引进种苗 ，尚 草本植物，原产地在 喜马拉雅 山脉及东南亚