高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法.pdfVIP

对《量与溉斌技术 OlO牟第37卷笳2囊 高效液相色谱的色谱柱的类型和流动相的选择方法 ChoicingWaysofChromatographicColumnandMobilPhaseaboutItPLC 徐 红 侯 健 (新疆昌吉州产品质量检验所，新疆 昌吉831100) 摘 要：高效液相色谱仪的核心是色谱柱。另外，流动相对改善分离效果也有重要的辅助效应。色谱柱的关键内容是制备出高效的填料。现代高效 液相色谱填料多使用键合固定相。色谱柱的填充技术直接影响柱效的发挥。在研究制定一个高效液相色谱方法时，选择适宜的流动相也很重要。 关键词：高效液相色谱；色谱柱；填料；流动相；溶剂 色谱柱的关键内容是制备出高效的填料。这些填料 在研究制定一个高效液相色谱方法时，选择适宜的 装成的色谱柱既要有好的选择性，又要有高的柱效。要 流动相也很重要。在选择流动相溶剂时，首先要考虑的 提高柱效是现代高效液相色谱的又一重要问题。所以填 是溶剂的物理性质，其次要考虑溶剂对所要分离样品的 料和装柱技术是关键 问题 。 容量因子，最后是所使用的溶剂要有分离能力。用作高 现代高效液相色谱填料多使用键合固定相，其固定 效液相色谱流动相溶剂，首先要满足以下几点要求：(1) 相膜很薄，因而大大提高了柱效。高效液相色谱填料的 容易得到；(2)适合于所用的检测器；(3)纯净、有一定的 基质有以下几种：(1)全多孔硅胶。现代高效液相色谱填 惰性；(4)无毒、使用安全；(5)对所分离的样品有一定的 料绝大多数用键合的方法把活性基团接枝到基质上，全 溶解性能。 多孔硅胶是使用最为普遍的基质。全多孔硅胶的孔径有 下面介绍选择流动相的要点： 三种类型：①微孔全多孔硅胶 ，孔径2nm；(2)中孔全多 (1)首先要考虑溶剂对检测器的适应性。 孔硅胶，孔径50nm，2nm；(3)大孔全多孔硅胶，孔径 高效液相色谱在多数情况下要使用紫外检测器，所 5Onot。高效液相色谱填料使用中孔和大孔全多孑L硅 以必须考虑所用溶剂在紫外波段的吸收。如使用示差折 胶，在分离低分子量的混合物时，选择 (6～15)nm孑L径 光检测器，要考虑溶剂的折光率。 的全多孔硅胶 ，其比表面相当于(5oo～200)m2／g。在分 (2)溶剂的活性 离合成聚合物或生物大分子时，要使用(15～100)rllTl的 有许多溶剂可能与样品发生反应，或在某些固定相 全多孔硅胶。如果使用2nm 的全多孔硅胶 ，色谱峰就 的存在下产生聚合，他们就不能作为流动相使用。 会拖尾。(2)其他金属氧化物基质。由于硅胶有一些缺 (3)溶剂的沸点和粘度 点：在碱性介质中(pH8)不稳定；在孔隙中大分子扩散 溶剂的沸点和粘度密切相关，低沸点的溶剂通常其 困难，降低柱效；硅胶表面上的剩余硅羟基有离子交换作 粘度也低。通常选用沸点高于柱温 (20～50)℃、粘度不 用。为此近年来用氧化铝、氧化锆、氧化钍和氧化钛作为 大于 5×10～Pa．S的流动相。 高效液相色谱填料的基质有很大的HPLC应用前景。 (4)高效液相色谱流动相溶剂的极性 高效液相色谱固定相有以下几种：(1)硅胶表面键合或涂 在分配色谱和吸附色谱中，溶剂的极性是用混合溶 渍各种聚合物。(2)其他氧化物表面上涂渍聚合物。(3) 剂的比例来调节的，一个极性强的溶剂和一个极性弱的 无孔单分散填料。(4)有机高聚填料。(5)灌注色谱填 溶剂经过适当的混合可以得到一定极性的混合溶剂。 料。(6)手性固定相填料。 (5)溶剂的选择性和溶剂的分类 色谱柱的填充技术直接影响柱效的发挥。如果