04细胞生物学研究方法.pptVIP

流式细胞仪 第二节 细胞组分的分析方法 ? ? 一、用超速离心技术分离细胞器和生物大分子及其复合物 用低渗匀浆、超声破碎等破坏细胞壁，后用差速离心（differential centrifugation）和密度梯度离心法分离。 分离技术是一大类技术的总称，包括细胞组分的分离和生物大分子的分离。 ? （一） 离心分离技术 离心分离细胞组分和生物分子是最常用的分离方法，因为不同的细胞器和分子有不同的体积和密度(图3-26)，可在不同离心力的作用下沉降分离。常用的两类离心分离方法是速度离心(velocity centrifugation)和等密度离心(isodensity centrifugation)。 图3-26 不同的细胞器、大分子和病毒的密度及相应的沉降系数 1.速度离心分离细胞器和大分子 在速度离心分离中有两种不同的方法: (1)差速离心(differential centrifugation)(图3-27)。 (2)移动区带离心(moving-zone centrifugation) (图 3-28) 图3-27 差速离心的原理 常用的是蔗糖密度梯度离心(sucrose density gradient centrifugation)。