生物技术在园艺植物育种中的应用 .ppt

第十一章生物技术在园艺植物育种中的应用 植物组织培养（Plant Tissue Culture） 将植物离体器官、组织或细胞等外植体，在适宜的人工培养基和无菌条件下，给予光照、温度等环境条件并培养，使其生长、增殖、发育形成小植株的方法。 狭义的组织培养仅指愈伤组织培养，广义的组织培养指各种类型的植物无菌培养技术。组织培养概念多指广义上的组织培养技术，包括胚胎培养、器官培养、组织培养(愈伤组织培养)、细胞培养、原生质体培养等。 第一节 组织与器官培养 相关专业术语 细胞全能性(totipotency): 一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力。 外植体(explant):用于培养的离体材料。 愈伤组织(callus):在培养过程中，从植物各种器官、组织的外植体增殖而形成的一种无特定结构和功能的细胞团。 胚状体(embryoid):由外植体或愈伤组织产生的,与正常受精发育方式类似的胚胎结构。 继代培养(subculture)：对外植体增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代培养。 组织和器官培养在育种中的作用 加快园艺植物新品种和良种繁殖速度 培养无病毒苗木 诱发和离体筛选突变体 进行种质资源长期保存和远距离运输 获得倍性不同的植株 克服种子发育和萌发中的障碍 克服远源杂交困难 提供育种中间材料 第二节　　花药与花粉培养 花药培养的基本程序 培养基 花药培养常用的基本培养基： MS（Murashigc Skoog，1962）； Nitsch (Nitsch，1969)； N6 (朱至清，1974)； B5 (Gamborg etal.，1976)。 附加成分：蔗糖, 激素。 花粉发育时期 四分体 →小孢子 → 单核花粉→双核花粉 最适期 花粉及小孢子培养 1．取材时期的确定 ? 四分体—单核早期—单核晚期—双核早期—双核晚期—三核期 单倍体在育种中有特殊的地位，其作用表现在 加倍后可迅速获得纯合型材料，缩短育种年限。 获得育种中间材料。 与诱变育种相结合可以提高诱变频率。 与细胞融合相结合，使这一育种途径更具有实际应用意义，无籽三倍体。 作为遗传工程受体更为有效。 用于基础遗传研究的各个领域?。 获得超雄植株（YY )。 可获得异源体附加系、代换系和易位系。 第三节 原生质体培养 原生质体培养和体细胞杂交的步骤 原生质体培养（Protoplast culture） 体细胞杂交（Somatic hybridization） 原生质体融合（Protoplast fusion） 一.原生质体的概念 原生质体(protoplast)：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。? 亚原生质体(subprotoplast)：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。它可以具有细胞核或没有细胞核。? 核质体(nuclearplast)：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。也称为微小原生质体(miniprotoplast)。? 胞质体（cytoplast）：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 二.原生质体的分离 1.分离原生质体材料的准备 无菌试管苗叶片 上胚轴和子叶 ? 培养细胞 2. 预处理及酶解 酶 材料预处理 在游离原生质体前对供体材料进行预处理及预培养，可以提高某些材料原生质体的活力和分裂频率。 用黑暗处理、低温处理和不同光质照射等方法，可提高某些材料原生质体的产量和活力。不同植物及材料类型预处理方法不同。 例如龙胆试管苗的叶片只有用4℃低温处理，甘蔗植株必须先在黑暗条件下培养12h后分离的原生质体才能分裂。 原生质体分离常用的商品酶 酶溶剂及其渗透压 ? 溶剂：原生质体培养基或特殊配制。 渗透压调节剂：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等。 酶处理 原生质体的收集和纯化 飘浮法：常用的飘浮剂有蔗糖、Percoll、Ficoll。 沉淀法：常用甘露醇作为渗透压调节剂，先将酶液洗出干净，再用Percoll飘浮一次。 4.原生质体活力测定 目测法：在显微镜下观察，根据细胞形态、流动性确定原生质体活力。? FDA法：FDA（二乙酸荧光素）是一种非极性物质，能自由地穿越细胞质膜，在活细胞内，FDA被酯酶裂解即发荧光（荧光素），由于荧光素不能自由通过质膜，因而可以在荧光显微镜下通过具荧光的细胞的观察确定细胞活性。 伊凡蓝法：伊凡蓝不能穿过质膜，只有质膜受到严重损坏，细胞才能被染色，因而可以通过细胞被染色与否确定活性。 影响原生质体活