FASN基因不同基因型的差异表达以及与牛奶脂肪酸组成的相关性分析.pdfVIP

中国畜牧兽医学会养牛学分会2011年学术研讨会论文集 words：SCD acid Key 1；genotype；differentexpression；fatty 脂肪酸合成酶(FASN)是一种多功能复合酶，是体内合成脂肪途径中的一个关键酶，它通过催 化乙酰CoA和丙二酰CoA而生成长链FA。FASN由两条相同的多肽组成，每条多肽有2500个氨基 酸残基和7个活性位点：酮酰基合成酶、丙二酰，乙酰转移酶、脱水酶、enoyl一还原酶、B．酮类还原酶、 酰基载体蛋白(ACP)和硫酯酶【ll。反刍动物FASN能够固定乙酰转移酶。乙酰转移酶能够特异性地 将反应底物的酰基链延长到12个碳原子，因此，它能够结合和释放这种中链FAt2J。这种特殊的中链 子的附着位置，导致了苏氨酸转变为丙氨酸【3】。脂肪酸合成酶主要受激素和日粮因素的调节，通过激 素调控区调节基因表达。主要发生在转录水平【4’习。本研究旨在探索中国南方荷斯坦奶牛群体内FSAN 基因的多态性及基因频率，并分析FASN不同基因型在奶牛乳腺组织中的表达差异以及与牛奶中脂肪 酸组成比例的相关性，以期为奶牛的选育提供遗传标记辅助选择。 1材料和方法 1．1样品的采集 扬州大学实验农牧场的303头中国荷斯坦奶牛，尾根采血，ACD抗凝，．20℃冷冻保存，样品样 品用常规方法提取基因组DNA。筛选FASN基因3种不同基因型个体各4头，每头牛生理状态基本 一致，胎次2胎，处于泌乳早期，且乳房炎检测为阴性，采集上述奶牛的奶样用于提取乳腺上皮细胞 存，用于脂肪酸组成与含量的分析。 1．2引物设计 Primer 利用Premier5．0软件根据GenBank RT．PCR引物，根据GenBankX00182的序列设计内参基因B．actin引物，引物序列及扩增片段长度见 表．1 表1引物序列 Tablel．Primers sequences 1．3 PCR。SSCP检测 lI p (25mmol／L)1．5L，dNTP(25mmol／L)0．5L，基因组DNAl|I L) L，上下游引物(10pmol／ll IlL，ddH2012．8lI 各1．0 L，退火温度56C。SSCP检测：产物变性后点样于10％的非变性聚丙烯酰 胺凝胶上电泳。电泳结束后银染显色。根据SSCP图像结果，选取每一位点每种基因型的典型个体各 ·194· 第=部丹营养与饲养管理技术 若干，送至上海生工生物工程有限公司测序。 1,4牛奶中总mRNA提取 参照李平”1和])_Jissantl71的实验方法。 1．5 RT·PCR和Real-timePeR dT1 pL， 参照TaKaP,a反转录试剂盒使用说明，反转录体系为20uL，1“g的总RNA，OEgo Buffer4 uL．加RnaseFreedH20至总体积为20uk反转录条 uL，Random6mer91#L，Enzymel 15min，85C 件如下：37C 5sec，所得产物即为cDNA。荧光定量PCR体系为20la L，ddH206．8 04uL，模板cDNA2u ExTaqTMlopL，上下游引物各0．4uL，荧光染料SYBRCrlMnI rain；95C变性15s，60℃退火 *L，每个样本设二个重复。荧光定量PCR扩增程序：95