急性单核细胞白血病THP-1细胞系白血病干细胞的分选、鉴定及靶向治疗的初步的研究.pdf

中文摘要 血病靶向治疗新策略。 第一部分急性单核细胞白血病细胞系THP．1白血病干细 胞的检测、分选及鉴定 目的： 探讨人急性单核细胞白血病THP．1细胞株中是否存在白血病干细胞 情况、耐药性及耐药蛋白、凋亡基因表达差异，从而进一步鉴定LSCs细胞， 了解其生物学活性及特性。 方法： 应用流式细胞术(FCM)N定THP．1细胞株中干细胞在对数生长期THP．1细 胞中的比例，然后分选THP．1白血病干细胞，FCM分析该LSCs亚群与非LSCs 亚群细胞周期。细胞生长曲线法和集落培养法比较LSCs亚群与非LSCs亚群细 胞的增殖能力和集落形成能力。MTT法检测两亚群细胞对阿糖胞苷(Ara—C)敏感 性。 因在两亚群细胞中表达差异。 结果： O．12 4-0．06％；收集分选后LSCs管细胞再次上流式细胞仪进行LSCs细胞纯度 检测示：细胞集中于之前的LSCs区域，比例高达97．0±1．7％。 2．收集分选后的THP．1LSCs和非LSCs，流式细胞仪检测两群细胞各样本的 细胞周期，可见在分选后的LSCs亚群中大部分的细胞处于静止期，C4Gl期比 例达94．03±1．61％，明显高于非LSCs比例，差异有统计学意义；非LSCs 亚群增殖期细胞比例相对较高，分别为S／G2／M期细胞比例为56．584-1．59％。 3．LSCs和非LSCs细胞的生长曲线不同。在接种后的第1和2天，二者无明显 差异，从第3天起LSCs细胞大量增加，快速增殖至指数生长期；非LSCs细胞 生长、增殖缓慢，在第5天进到平台期。LSCs和非LSCs生长速度差异显著(P II 中文摘要 个集落细胞数量高于非LSCs组。 LSCs细胞，24小时对THP．1 uM 149uM，48小时对THP．ILSCs的IC50值为198uM，非LSCs的IC50值为138 (P=0．042)。 群(P0．05)。 结论： 在人急性单核细胞白血病THP．1细胞株中确实存在LSCs细胞，这群LSCs 细胞比例少，其和主群细胞相比在集落形成能力、生长增殖能力和耐药蛋白、 凋亡基因表达上有异质性，大部分处于静止期，可能与肿瘤的耐药和复发有关。 关键词：急性髓细胞白血病；白血病干细胞；流式细胞术；ABC转运体家族 III 中文摘要 第二部分NOD／SCID小鼠THP一1细胞系急性单核细胞白血病 模型的建立 目的： 研究CD47在不同细胞亚群中的表达，为寻找儿童急性髓细胞白血病治疗的 靶点提供实验基础；通过将分选的人急性单核细胞白血病THP．1干细胞移植到 NOD／SCID小鼠，探讨其致瘤能力。 方法： 应用流式分选技术分选THP．1LSCs，并用阿糖胞苷富集THP．1中的LSCs， 流式细胞仪检测CD47在不同亚群THP．1细胞中的表达，计算检测到的CD47+ 比例。NOD／SCID小鼠分别经尾静脉接种不同亚群及剂量的THP．1细胞，比较 不同实验组小鼠的生存时间、组织病理改变及通过流式细胞术检测CD33、CD45 在模型鼠外周血、骨髓及肝、肺组织中的表达，比较不同细胞数量和种类接种。 小鼠的成瘤率及生存率。 结果： 1．CD47在THP．1细胞不同亚群中的表达有差异，在未分选的THP．1细胞的 表达最低，随着与阿糖胞苷作用时间增长，LSCs比例增高，CD47表达升高， 在分选的THP．1LSCs中表达最高，差异有统计学意义(P0．05)。 浸润模型，未分选的THP．1细胞至少需要1x106才能成瘤，1x103数量的 THP一1LSCs与抗CD47单克隆抗体共移植组仅有1只检测到白血病细胞，成瘤 率低于THP．1LSCs移植组。各组间白血病发病率差异有统计学意义(P0．05)。 3．THP．1干细胞NOD／SCID小鼠腹腔可见实体肿瘤块，取瘤块做病理，可见 大量白血病细胞。接种后3周外周血可见白血病细胞，骨髓形态学检测见大量 原始和幼稚细胞，流式细胞仪检测