013外周血T淋巴细胞的培养纯化及鉴定细胞培养淘汰法.pdfVIP

维普资讯 JOU131alofZhengzhouUniversity(MedicalSciences) Ju1． 2006 Vo1．41 No．4 · 605 · 系列研究 I作者简介 李付广，男，博士，郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室副教授 ，硕士生导师，河南省微生物学会秘书长，河南省 免疫学会常务理事 ，中国免疫学会和微生物学会终身会员。 1988年 以来主要从事医学微生物学与免疫学教学和科研工作 。先后承担省级科研课题 2项，厅级课题 3项；发表及交流 论文20余篇；获河南省科技进步二等奖 l项、三等奖2项，厅级科研成果奖4项；担任 《医学免疫学与微生物学》主编、《医学 免疫学与微生物学基本实验技术》主编、《临床免疫学基础》主编。2004年在 日本 国立旭川医科大学微生物学与免疫化学讲座 研修 ，主攻非特异性免疫与肿瘤关系。 本 系列研究主要 内容 ：①提取肿瘤细胞膜蛋 白和小肽方法的建立 ；②分离纯化膜蛋 白和小肽 ；③刺激特异性 CTLs产生 ， 确定高效肿瘤抗原的大致范围。为肿瘤的免疫治疗提供基本参数 。 外周血 T淋巴细胞的培养、纯化及鉴定 李付广 李 沛 靳 静 董子明 1)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室 郑州 450052 2)郑州大学基础 医学 院病理生理学教研室 郑州 450052 3)河南职工医学院 郑州 450003 关键词 T淋巴细胞；流式细胞术；细胞培养；纯化 中图分类号 R392 摘要 目的：建立外周血 T淋 巴细胞初步纯化方法。方法：取健康人外周血单个核细胞 (PBMCs)，在低剂量 IL一2维持下，利用细胞培养淘汰法筛选纯化 T淋巴细胞 ，用流式细胞术检测淋 巴细胞培养过程 中细胞表面标志的 改变。结果：用流式细胞术检测发现 ：B淋巴细胞于第 l周时基本死亡 ，第 3周时完全消失；NK细胞于第 l周时明 显增加 ，第 4周时大部分死亡 ；第 4周时，所培养的细胞绝大多数为 T淋巴细胞 。T淋巴细胞亚群 的整体变化趋势 为 ：随着培养时间的延长 ，CD4 百分数稍增加 ，CD8 百分数 明显增加 ，CD4 ／CD8 比值 明显降低 ，CD3 CD16 CD56 百分数 明显增加 。结论 ：在 IL一2维持下，人 PBMCs培养4周时，收获培养细胞为初步纯化 的T淋 巴细胞 。 Cultivation，purificationandidentificationofT lymphocytesfrom periph— eralblood LIFuguang” LIPei ，J11VJing引，DONGZiming ， J)DepartmentofMicrobiologyandImmunology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversity， Zhengzhou450052 2)DepartmentofPathophysiology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouU- niversity，Zhengzhou450052 3)HenanMedicalCollegeforStaffandWorkers，Zhengzhou450003 Keywords T lymphocyte；flow cytometry；cellculture；purification Abstract Aim ：ToestablishthemethodsofpurifyingT lymphocytesfrom peripheralblood．Methods：W ithflow cy— tometry(FCM)，thevolunteergperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)CO—cultivatedwithIL一2wereobservedtoget theirdifferentiationinformation．Results：MostofB lympho