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1真核表达载体的构建.pdf

( ) 第24 卷第6 期 西  安  交  通  大  学  学  报    医  学  版   V ol. 24 N o. 6 2 0 0 3 年 1 2 月 J ournal of Xian J iaot ong U niversit y ( Medical Sciences) Dec. 2003 ◇论   著 ◇ AntiCD3 scFvB7. 1 真核表达载体的构建 及在 COS7 细胞中的初步表达 1 ,2 1 1 1 1 杨章民 , 孔令洪 , 来宝长 , 王一理 , 司履生 (1. 西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所 ,陕西西安 710061 ;2. 陕西师范大学生命科学院,陕西西安 710062) ( 摘 要 : 目的  构建 antiCD3 scFvB7. 1 真核表达载体 , 并进行初步表达。方法  采用重叠延伸拼接法 splicing by ) ( ) overlap extention , SOE 将 antiCD3 scFv 和 B7. 1 V + C 两个基因片段通过 spacer 序列连接 ,将融合基因克隆入 T 载 体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/ antiCD3 scFvB7. 1 , 并经脂质体法转染 COS7 细胞 ,免疫组 织化学法检测表达。结果  获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗 CD3 scFvB7. 1 融合基因真核表达载 体 ;在 COS7 细胞中获得初步表达。结论  成功构建及表达抗 CD3 scFvB7. 1 融合基因真核表达载体 ,为进一步研究 抗 CD3 scFvB7. 1 双功能分子的生物学活性及用于肿瘤生物治疗奠定了基础。 关键词 :抗 CD3 单链抗体 ; B71 ; 重叠延伸拼接法 ;真核表达 ( ) 中图分类号:Q784 ; Q786 文献标识码 :A 文章编号 : 2003 Construction of antiCD3 scFvB7 . 1 eukaryotic expression vector and preliminary expression in COS7 cells Yang Zhangmin , Kong Linghong , Lai Baochang , Wang Yili , Si L üsheng ( Institute for Cancer Research , College of Life Science and Technology ,

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