2013HDN实验设计实验报告(新版).docVIP

临床输血与检验创新性实验设计 二级学院：检验学院 教研室：临床检验学 实验名称 母婴Rh血型不合的新生儿溶血病检查的实验设计 专业：医学检验 层次：本科 年级：2009 小班： 课题组主要成员 姓名 性别 学号 备注 王千慧 女 林日娟 女 10203070229 钟晓 女 10203070230 陈远晓 女 10203070232 卢雪如 女 10203070217 卢宇东 男 周 杰 男 朱虹亮 男 10203070233 周伟泽 男 新生儿溶血病是由于母婴血型不合，胎儿红细胞进入母体循环致使母体产生了相应的IgG类抗体。该抗体作用于胎儿红细胞而引起的同种被动免疫性疾病。HDN可引起婴儿贫血、黄疸、水肿、肝脾肿大，严重者可导致胆红素脑病，引起新生儿死亡或智力发育障碍。因此，对HDN进行早期、准确的诊断有重要意义。 新生儿溶血病的患儿血清学检测主要是“三项试验”，即：直接抗球蛋白试验(DAT)；血清游离抗体测定试验；新生儿红细胞抗体释放。但由于微柱凝胶技术利用分子筛效应和亲和效应，红细胞抗原与相应的抗体结合，经离心，便可检测血型、不完全抗体及作交叉配血试验，具有操作简单、结果准确、敏感且易于判读等优点，所以本实验设计主要采用微柱凝胶试验和直接、间接抗人球蛋白试验以及相关的辅助检查来对母婴Rh血型不合的新生儿溶血病作出诊断。 一、实验设计 （一）标本、试剂及器材 标本：静脉血 试剂：微柱凝胶试验【抗人球蛋白凝胶微柱卡：含有抗人球蛋白（抗IgG+C3），可用于检测IgG类不完全抗体（间接抗球蛋白试验），IgG类不完全抗体（或）补体致敏红细胞（直接抗球蛋白试验）】 抗人球蛋白试验【5%筛检红细胞（试剂红细胞，用于间接抗人球蛋白试验）、抗球蛋白试剂盒（商品试剂，用于直接抗人球蛋白试验）、IgG包被的红细胞、生理盐水】 器材：微柱凝胶试验【微量吸样枪、微柱凝胶检测卡专用离心机】 抗人球蛋白试验【试管、记号笔、试管架、滴管、乳胶吸头、吸量管、洗耳球、载玻片、离心机、显微镜、滤纸】 （二）主要实验 产前检查 微柱凝胶试验 （1）检测血型 1.将受检者红细胞（不用洗涤）配成1%生理盐水悬液，向已标记好的特异性凝胶微柱卡的微管反应腔内加50μL。 2.立即与1000转每分钟，离心10分钟，观察结果 3.观察及判断血型结果：阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。阴性：对照管和检测管的细胞沉淀均在管底。实验失败：对照管细胞在胶上或胶中，重新试验。 4.报告方式：Rh(D)血型阴性/阳性 （2）筛检和鉴定不完全抗体 1.取筛检红细胞或谱细胞悬液（1％红细胞生理盐水悬液）各50μL，分别加入标记好的微管反应腔中。 2.然后分别立即加入受检血清25μL。 3.将已加好反应物的凝胶卡放入孵育?? 4.取出凝胶卡立即以1000r/min水平离心10min，观察结果。 5.观察及判断血型结果：同血型检测。 6.报告方式：筛检试验 阳/阴性。 间接抗人球蛋试验 1.加血请：分离父亲或母亲（胎儿则取羊水血型物质）将已加好反应物的凝胶卡放入孵育?? 4.取出凝胶卡立即以1000r/min水平离心10min，观察结果。 5.观察及判断血型结果：同血型检测。 6.报告方式：筛检试验 阳/阴性。 间接抗人球蛋试验 1.加血请：分离父亲或母亲血清（胎儿的则取羊水血型物质），取两滴置于标记好的小试管中 2.滴加5%筛检红细胞1滴于小试管中，混匀。 3.温育：37度温育30-60min。 4.离心：以1000r/min离心1min 5.观察：观察是否有溶血和凝集，并记录结果 产前检查 微柱凝胶试验 直接抗人球蛋试验 1.洗涤红细胞：彻底悬浮细胞，用盐水洗涤5次。最后一次洗涤后，弃掉全部盐水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。 2.加抗球蛋白：按试剂说明加最适稀释度抗人球蛋白血清1滴，充分混合。 3.离心：以1000r/min离心1min 4.观察：轻轻悬浮细胞，观察是否有溶血或凝集，有溶血或凝集为阳性，否则为阴性。 5.复核：阴性者应加IgG包被的红细胞1滴，离心并观察结果：①凝集，表示阴性结果可靠。②不凝集，表示试验无效，必须重做。 （三）辅助实验 5.观察：是否有凝块和溶血，并记录结果。 产后检测 可疑Rh 等其他血型系统血型不合应在出生后尽早为好。 微柱凝胶试验 （1）检测血型 1.将父亲或母亲或婴儿红细胞（不用洗涤）配成1%生理盐水悬液，向已标记好的特异性凝胶微柱卡的微管反应腔内加50μL。 2.立即与1000转每分钟，离心10分钟，观察结果。 3