3_唾液淀粉酶活性的观察.pptVIP

注意事项 按讲义要求操作 酶同时放，唾液、淀粉摇匀 纱布不要扔在水池 值日：5-6组 * 实验三 唾液淀粉酶活性的观察 动物医学院动物生化教研室 * 掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性 了解各种因素（如温度、pH及一些化学物质）对酶活性的影响 唾液淀粉酶的制备和活性观察 一、实验目的 * 二、实验原理 酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化剂。 酶活性: 酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示 酶活性的测定方法：1）定底物 2）定时间 影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH, 激活剂和抑制剂 等都会影响酶的催化活性。 二、实验原理 pH值的影响: 能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适pH。 温度的影响: 在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度。 激活剂和抑制剂的影响: 能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。 * 本实验以淀粉为底物, 淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。 淀粉酶 淀粉酶 淀粉——————→糊精—————→ 麦芽糖+少量葡萄糖 加碘后；（兰色） （紫红色、暗褐色或红色等） （棕黄色，碘本身颜色） * 二、实验原理 影响酶活性的因素 1）温度 2）pH 3）激活剂和抑制剂 酶的特性（专一性） 还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理 C6H12O6 + 2Cu(OH)2 C5H11O5.COOH + Cu2O + 2H2O OH- 加热 实验原理 三、试剂及器材 1. 试剂 ? （1）0.5% (w/v) 淀粉溶液 ? （2）稀碘溶液 ? （3）不同pH缓冲液 (pH5.0 、6.8、8.0) ? （4）1% (w/v) NaCl溶液 ? （5）1% (w/v) CuSO4溶液 2. 器材 ? 比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管 * 四、操作步骤 1. 温度对酶活力的影响取3支试管，编号后按下表操作: * 试管编号 1 2 3 0.5% 淀粉 5 5 5 pH 6.8 缓冲液 0.5 0.5 0.5 反应条件 置冰水浴中 置37℃水浴中 置沸水浴中 稀释唾液 1 1 1 单位：mL 在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。 每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。 待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。 摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。 * 2. pH值对酶活力的影响 取3支试管，按下表编号后进行实验。 * 四、操作步骤 单位：mL 试剂 1 2 3 0.5% 淀粉 2 2 2 pH 5.0 缓冲液 2 — — pH 6.8 缓冲液 — 2 — pH 8.0 缓冲液 — — 2 稀释唾液 1 1 1 摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理。 （1）每隔1min从pH6.8的试管中取出1滴反应液滴于预先滴加稀碘液的白瓷板上，观察其颜色变化。 （2）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释pH对酶活性的影响。 * 3. 酶反应的特异性 取2支试管，按下表编号后进行实验。 * 四、操作步骤 单位：mL 试剂 1 2 0.5% 淀粉 2 — 0.5% 蔗糖 — 2 稀释唾液 1 1 将各管摇匀后，一起放入37℃水浴中保温10min。 取出试管，分别加入斑氏试剂 1 mL，混匀。 将各管置于沸水浴中煮沸2-5 min。观察并解释结果。 * 4.激活剂与抑制剂对酶活力的影响 取3支试管，按下表编号后进行实验。 * 四、操作步骤 单位：mL 试剂 1 2 3 0.5% 淀粉 3 3 3 pH 6.8 缓冲液 0.5 0.5 0.5 1%NaCl溶液 — 1 — 1%CuSO4溶液 — — 1 蒸馏水 1 — — 稀释唾液 1 1 1