3脑脊液常规检查的标准操作程序.docVIP

一、目的 规范脑脊液常规检查。 二、适用范围 适用于脑脊液的常规检测，包括：一般性状的检查、潘氏试验、细胞总数计数、白细胞计数与分类、革兰氏染色、抗酸染色、墨汁染色。 三、支持性文件 《全国临床检验操作规程》(第三版)、《临床检验基础》（第三版） 四、标本处理 1、标本收集后应立即送验，一般不能超过1h。收到标本后应立即检查，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解。 2、细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝。 五、一般性状检查 主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等。脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养基。 1、红色： 如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意： (1)将血性脑脊液试管离心沉淀(1500r／min)，如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血的时间已超过4h。如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。 (2)红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可见到。因脑脊液渗透压较血浆高所致。 2、黄色： 除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色。黄疸患者的脑脊液也可呈黄色。但前者呈黄色透明的胶冻状。 3、米汤样： 由于白(脓)细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。 4、绿色： 可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。 5、褐或黑色： 见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。 五、潘氏(Pandy)球蛋白定性试验 1、原理 脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。 2、试剂 5％苯酚溶液：取纯苯酚25m1，加蒸馏水至500m1，用力振摇，置37℃温箱内1—2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。 3、操作 取试剂2—3m1，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液l一2滴，衬以黑背景，立即观察结果。 4、结果判断 阴性：清晰透明，不显雾状。 极弱阳性(土)：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。 弱阳性(十)：灰白色云雾状。 阳性(2十)：白色浑浊。 强阳性(3十)：白色浓絮状沉淀。 最强阳性(4十)：白色凝块。 5、临床意义 正常时多为阴性。有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。 六、细胞计数 （一）、细胞总数 1、器材及试剂 (1)细胞计数板； (2)红细胞稀释液(配法同血液红细胞稀释液)。 2、操作 (1)对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每μl的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每μl脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以106。 (2)浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入含红细胞稀释液0．38m1的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每μl脑脊液的细胞总数。 (二)、白细胞数 1、非血性标本： 小试管内放入冰乙酸1—2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3—4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。 2、血性标本： 将混匀的脑脊液用1％冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。 每μl脑脊液内白细胞校正数＝每μl脑脊液内白细胞未校正数 每μl脑脊液内内红细胞数×每μl血液内白细胞 - ────────────────────── 每μl血液内红细胞 3、参考值 正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞。 成人：(0—8)×10ˇ6/L 儿童：(0一15)×10ˇ6/L 多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞。 4、附注 (1)计数应及时进行，以免脑脊液凝固，使结果不准确。 (2)细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。前者不溶于乙酸，加优质墨汁后可见不着色的荚膜。 (3)计数池用后，应用75％乙醇消毒60min。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。 (三)、细胞分类 1、直接分类法： 白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞)和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。 2、染色分类法： 如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清l滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干