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1.封面格式要求： （具体题目自拟） 2．论文格式： 内吞金纳米粒子的鼻咽癌细胞SERS光谱 黄浩1，潘建基3，陈伟炜1,2，陈奇松3，冯尚源2，苏颖3，许雄伟4，陈荣2 1．福建中医学院中西医结合系, 福建 福州　350108 2．医学光电科学与技术教育部重点实验室（福建师范大学）, 福建 福州　350007 3．福建省肿瘤医院, 福建 福州 350014 4．福建医科大学附属第二医院, 福建 泉州 362000 摘要：本文采用内吞方法将金纳米粒子引入细胞内，测试分析了单个活性CNE-1鼻咽癌细胞的常规拉曼光谱和SERS光谱，并对其进行初步谱峰归属。CNE-1细胞的常规拉曼光谱只有6个主要的拉曼峰：718、1001、1123、1336、1446、1660 cm-1；沉积于细胞内的金纳米粒子强烈地增强了细胞内生化物质拉曼信号，在内吞金纳米粒子的CNE-1细胞的拉曼光谱中出现了20多个SERS拉曼信号，主要拉曼峰的强度明显高于常规拉曼信号。DNA骨架振动（1026、1097、1336和1585cm-1）证明金纳米粒子通过内吞作用而进入细胞核内。结果表明，基于胶体金SERS技术可能为活性鼻咽癌细胞内生化物质的探测提供一种高灵敏的方法。 关键词: 表面增强拉曼散射（SERS）；金溶胶；人鼻咽癌细胞株 中图分类号：O657.37（拉曼光谱分析法 R739.6 （耳鼻咽喉肿瘤 A 文章编号： 引 言 拉曼光谱可提供物质化学结构的准确信息，它已成为生物医学分析的最有前途的工具之一[1]。但拉曼散射截面很小，一般为10-30~10-25cm2/分子，细胞内含微量生化物质，加之需要控制激发光强度以避免细胞的伤害，因此单个细胞的常规拉曼信号微弱。SERS光谱可以增强散射截面几个数量级并可实现单分子探测[2]。 鼻咽癌（NPC）具有显著的人种和地域分布，中国南方人是此病的高发人群[3]。对鼻咽癌细胞的研究手段主要有：放射诱导、免疫组化定量分析、基因研究、光动力学研究。目前对鼻咽癌的早期诊断还存在困难，人们正探寻高灵敏的鼻咽癌细胞或组织的检测方法，本项目组也获某些有意义结果[4, 5]。 溶胶金纳米粒子已应用于生物分子的检测，如将DNA分子与金纳米微粒子结合可以提高发现遗传基因的效率[6]。此项工作的动力来源于对探索细胞局部生物化学性质的渴望，另外，一些研究也利用SERS去鉴别单个活性肠上皮细胞HT29内的元素成分[7]。本文首次报道内吞金纳米粒子的单个活性鼻咽癌细胞近红外SERS光谱，获得单细胞内SERS光谱信号。 1实验与方法 1.1　实验仪器 实验在Renishaw公司生产的inVia共聚焦显微拉曼光谱仪上进行，仪器的分辨率为2cm-1，用波长为785nm，功率为200mW半导体激光器作为激发光源，拉曼光谱范围：300～2000cm-1。 1.2　样品来源与制备 细胞培养：人鼻咽癌 CNE-1 细胞株由福建省肿瘤医院提供并在福建师范大学培养。CNE-1细胞株在含10%进口小牛血清，100U/mL的青霉素和链霉素，PH值为7.2的RPMI-1640培养液中，置于37℃、5%CO2 的培养箱中培养。定期观察，最后选用对数生长期细胞进行实验。图1为石英玻片上的单个CNE-1 细胞显微图像，其外形近乎为圆形，长度约为15um。 实验试剂：柠檬酸三钠，氯金酸(HAuCl4 ·3H2O) 纯度大于98 %，以上试剂均为分析纯。所有实验用水均为超纯水，电阻率≥25. 0 MΩ·cm。 金胶的制备[8]：50ml 1.0×10-4g/ml HAuCl4在强烈搅拌下加热至沸腾，加入0.5ml 1%柠檬酸三钠，保持沸腾15min，后自然冷却至室温。金胶的紫外-可见吸收光谱Lambda 950紫外-可见-近红外分光光度计535nm，见图2。金胶的中国科学院福建物质结构研究所0nm左右，见图3 。 1.3　表面增强拉曼光谱的测定 将一定量无菌金胶注入培养细胞的孔板中，由于内吞作用，鼻咽癌细胞会将金纳米粒子吞入。在孔板放入培养箱24小时后，作为载体的石英玻片被取出并放在样品架上，最后单个细胞被选择进行拉曼检测。在被检测前，石英玻片上的细胞用PBS清冼三遍，防止营养液对拉曼检测的干扰。在本实验中，激发光波长为近红外785 nm，照射到细胞的激光功率为20mW , 曝光时间为10s，因此对细胞生物活性的影响很小。分别采集了15个内吞金纳米粒子的活性鼻咽癌细胞的拉曼光谱和15个活性鼻咽癌细胞的常规拉曼光谱，对于每个细胞按照平均位置分布3个点。 2　结果与讨论 实验选取单个活性CNE-1鼻咽癌细胞进行测量，所有的光谱都使用硅的520cm-1拉曼峰进行校准，最后得到单个内吞金纳米粒子的CNE-1活细胞的 表面增强拉曼光谱（图4a）和 常规拉曼光谱（图4b）。 CN