反义N_ras1基因抑制血管紧张素_诱导的心肌细胞增殖和肥大.pdfVIP

( ) 5·48 · 中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　1999 ,15 6 　 反义N - ras 1 基因抑制血管紧张素 Ⅱ 诱导的心肌细胞增殖和肥大 ( ) 北京医科大学第二临床学院心血管内科 北京 100044 　孙 　旗 　徐成斌 　　摘 　要 　目的 :探讨逆转录病毒介导的 N - ras 1 基因对血管紧张素 Ⅱ诱导的心肌细胞增殖和肥大的抑制作用 ,及 其应用于心肌肥厚基因治疗的可能性。方法 :将重组逆转录病毒反义 N - ras 1 基因体外转染乳鼠心肌细胞。应用 RT 3 - PCR 及 Western 印迹法检测基因表达情况。应用细胞计数、[ H] - TdR 掺入及细胞体积检测手段 ,观察N - ras 1 基因 对心肌细胞增殖及肥大的抑制作用。结果 :逆转录病毒载体能将外源性基因导入心肌细胞并表达。反义 N - ras 1 基 因导入可抑制心细胞增殖及肥大。结论 :逆转录病毒介导 N - ras 1 基因有可能作为心肌肥厚的基因治疗手段。 主题词 　基因 ;心肌 ;细胞 , 培养的 ;血管紧张素 Ⅱ;原癌基因 　　心肌肥厚是心肌及其间质细胞对生长因子的一 倍后 ,转染心肌细胞。 种应答反映 ,是体内一系列基因异常表达的结果。血 　　3RT - PCR 定量检测 N - ras mRNA 表达 :采用 ( ) 管紧张素 Ⅱ angiotension Ⅱ,Ang Ⅱ是影响心肌肥厚 一步法提取细胞总 RNA 。用PE 公司的反转录试剂盒 的主要因子 ,具有促心肌细胞增殖和肥大的作用[1 ] 。 对提取的 RNA 进行反转录以获得 cDNA 。再进行 原癌基因 ras 表达产物 p21 蛋白是一种小分子量的 G PCR 双扩增反应 , 同时加入N - ras 引物一对和β- [2 ] actin 引物一对在同一体系中扩增N - ras 和 β 蛋白 ,可与 GTP 结合向细胞内传递增殖信息 。因而 - actin Ang Ⅱ的作用可能与p21 蛋白有关。本研究选用逆转 这两个目的片段。 录病毒载体重组反义N ras 1 基因体外传染乳鼠心肌 　　N - ras 引物序列: 细胞 ,观察对心肌细胞增殖和肥大的作用 , 以探讨利 　　5 ’- CTGGTGTGAAATGACTGAGT 用反义技术治疗心肌肥厚的可能性。 5 ’- GGTGGGATCATATTCATCTA β 　　actin 引物序列: 材 　料 　与 　方 　法