反义寡核苷酸设计策略与学习记忆研究.pdfVIP

中国行为医学科学 1999 年第 8 卷第 1 期 ·73 · ·综　　述· 反义寡核苷酸设计策略与学习记忆研究 熊　鹰　蔡文琴　李希成　隋建峰 　　反义核酸是指与体内某 RNA 或DNA 序列具有互补顺 异抑制效应及是否存在副作用。以往的实验常用正义链 序, 并能通过碱基配对与互补链杂交, 从而影响其转录或翻 ( sense) 作对照, 现在一般采用无义 ( m issense) 或反向( re 译过程的RNA 或DNA 片段。反义RNA 和DNA 的特异性 verse) 作对照。 源自反义序列和靶序列之间的碱基配对。反义核酸的长度可 二、反义ODN 在学习记忆研究中的应用 长可短, 长的反义核酸一般都借助表达载体导入细胞, 通过 现代分子生物学技术使研究者发现越来越多的基因在 在细胞中进行转录而实现功能。反义寡核苷酸 (antisense 中枢神经系统表达。然而, 我们对于这些基因的功能了解很 o ligodeoxynucleo tides , ODN ) 是短序列的单链DNA , 在体外 少或者根本不了解。反义寡核苷酸技术能够有效的探讨这些 通过化学合成, 与细胞内特异的靶序列互补。 比通过表 基因的作用。R ickm an 同时使用了转基因Knockout 和反义 ODN 达载体导入的方式应用广泛, 而且由于它可以作为反义药物 knockdow n 技术研究 trkb 配基在视网膜神经元发育中的作 应用于临床, 因此, ODN 的研究已引起了广泛的重视[1, 2 ]。 用, 反义 knockdow n 技术避免了 trkb 转基因操作的一些缺 点, 尤其是转基因小鼠出生后极低的存活率。 认为 一、反义ODN 的作用机理及设计策略 Robertson 反义 ODN 主要通过以下途径发挥作用: ( 1) 抑制翻 反义途径比转基因技术有很多优越性, 如应用范围广、具有 译[3、4 ]. 反义ODN 通过与目标mRNA 发生碱基特异性互补 可逆性和解剖特异性、没有复杂的发育问题以及花费较低 [2 ] 结合, 形成杂交双链体, 阻止核糖体与重要起始因子结合, 使 等 。 其不能启动翻译; 一般以针对翻译起始区的ODN 效果最佳, 学习记忆的研究需要弄清特异脑区的分子机制和由学 在此区域内可直接抑制翻译起始复合物与 mRNA 起始位点 习产生的行为修饰的因果关系, 采用传统的神经电生理和生 ( ) 化的方法, 搞清这一关系较为困难。现在通过转基因小鼠和 结合。 2 抑制转录后加工. 真核生物mRNA 的核内加工包 括 5’ 端加帽结构、内部甲基化、3’ 端加po lyA 及剪接等 , 最 反义核酸两个途径使我们能够研究特异的基因在学习记忆 后转运到胞质成为成熟的mRNA , 反义ODN 可影响其中的 过程中的作用。本文综述反义ODN 在学习记忆研究中的应 ( ) 用。 任一环节。 3 抑制DNA 复制和转录. 反义ODN 通过在 DNA 结合蛋白的识别位点处与DNA