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5株乳酸菌的分离鉴定与生物学特性研究.pdf

. . — — 390--—— 江苏农业科学 2011年第 1期 王晓丽,王永山,诸玉梅 ,等.5株乳酸菌的分离鉴定与生物学特性研究[J].江苏农业科学,2011(1):390—392 5株乳酸菌的分离鉴定与生物学特性研究 王晓丽 ,王永山 ,诸玉梅 ,朱小翠 ,刘小娟 ,周 宇 ,王 冉 (1.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室,江苏南京210014; 2.南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;3.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,江苏南京 210014) 摘要:从泡菜和仔猪粪便中分离出5株乳酸菌 ,分别命名为RS、RB、RFT、RST、RO,结合细菌形态学、生理生化特 性和 16SrRNA序列同源性分析进行鉴定,并对其特性进行了研究。结果表明RS菌株为植物乳杆菌,RB、RO菌株为 粪肠球菌,RFT、RST为屎肠球菌。其中RS菌株具有较好的耐酸性、一定的胆盐耐受力 ,对温度敏感 ;RB、RFI、RST、 RO菌株对模拟肠液具有较强的耐受力,45~55℃处理30min不影响其生长 ;5个菌株对大肠杆菌 O 和沙门氏菌的 抑菌率均达到98%~100%,可作为优 良的益生菌候选菌。 关键词 :乳酸菌;分离鉴定;生物学特性 中图分类号 :R285.5 文献标志码:A 文章编号:1002—1302(2011)01—0390—03 乳酸菌是一类分解糖类以产生乳酸为主要代谢产物的革 5min,上清中即含 16SrRNA基因。根据GenBank中登录的 兰氏阳性菌的统称,包括乳杆菌属、明串珠菌属、肠球菌属和 乳酸菌 16srRNA 的序列设计引物 F:5 一TCGGCTCGTA— 足球菌属等。乳酸菌是一种安全、优质、高效的益生菌,目前 AAACTCTG一3,R:5一GGACTrAACCCAACATCTCA一3,扩 应用于饲料添加剂的主要有植物乳杆菌、双歧乳杆菌、嗜酸乳 增片段长 682bp。引物 由Invitrogen公司合成。PCR扩增体 杆菌和粪链球菌等 。。为获得具有优 良益生特性的乳酸 系为50 L,93℃预变性 3min;94℃45S,55℃ 1min,72℃ 菌,本研究对来源于仔猪粪便和泡菜中的5株乳酸菌进行了 1.5min,30个循环;72℃延伸 10min。PCR产物回收后与 分离鉴定,并对其特性进行了研究。 pMD18一T载体连接,经氨苄抗性与蓝白斑筛选,BamH I和 HindⅢ双酶切鉴定,阳性质粒由Invitrogen公司进行测序。 1 材料与方法 1.2.4 生长曲线的测定 将活化的菌株以2%的接种量接 1.1 材料 种于MRS液体培养基中,35℃,200r/min,培养 36h,每隔 (1)样品:断奶仔猪购 自南京军区后勤农场;泡菜购 自蔬 2h取样,在600nm下测定吸光值,绘制生长曲线图。 菜市场。(2)菌株:大肠杆菌O 、沙门氏菌为江苏省农业科 1.2.5 耐胆盐试验 将活化后的菌株按 2%的接种量接种 学院兽医研究所保存的菌种。(3)培养基:MC固体培养基, 于胆盐浓度为0、0.3、0.6g/L的MRS液体培养基中,35℃、 MRS液体培养基购 自青岛海博生物科技有限公司;麦康凯琼 200r/min下培养16h,测各组菌液的D 。 脂培养基购 自南京卓越生物科技有限公司。(4)主要试剂: 1.2.6 温度敏感试验 将菌株活化后,以2%的接种量接种 猪胆盐、胰蛋 白酶购 自南京博全生物科技有限公司;鉴定所用 于 5管 MRS液体培养基 中,分别于45、50、55、60℃处理 全部试剂均购 自青岛海博生物科技有限公司;PCR试剂盒、 30min,留 1管不处理作为对照。35℃、200r/min下培养 胶回收试剂盒等购 自Invitrogen公司。 16h,测各组菌液的D 。 1.2 方

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