小鼠哮喘模型的建立及其相关机理初步研究.pdfVIP

维普资讯 140 实验动物与比较医学 LaboratoryAnimalandComparativeMedicine Sep．2005，25(3) 小鼠哮喘模型的建立及其相关机理初步研究 黄 莉 ，胡玉敏z，陈煦艳 ，施 勤 ，季 伟 (1．苏州大学附属儿童医院呼吸科，苏州 215003；2．苏州大学生命科学学院，苏州 215007) [摘要]目的通过制备BALB／c小鼠过敏性哮喘模型，研究共刺激分子OX40在哮喘中的表达。方 法腹腔注射卵蛋白致敏小鼠，两周后雾化吸入卵蛋白激发哮喘发作，以生理盐水腹腔注射及雾 化吸入为空白对照。比较支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数百 分数；肺组织HE及PAS染色以确定动物造模是否能模拟哮喘的病理状态；肺组织冰冻切片行免 疫组化检测哮喘小鼠肺组织OX40的表达情况。结果 卵蛋白激发后，小鼠的支气管肺泡灌洗液 中的细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞百分数较对照组增高，且差异有统计学意义，哮喘小鼠 肺组织中OX40的表达明显增多。结论 BALB／c小鼠是制备过敏性哮喘的理想模型，哮喘时小鼠 肺组织中Ox40的表达明显增多。 [关键词]小鼠；过敏性哮喘；模型；OX40 [中图分类号]Q95—33 [文献标识码]A [文章编号]1004—8448(2005)03—0140—03 支气管哮喘是 由嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T 模型组和对照组，每组各 12只f实验许可证号 淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症性疾 SYXK(苏2002—0037)]。 病。近年来，哮喘发病机制 中的CD4T淋巴细胞 1．2 模型制备 的作用逐渐成为哮喘基础研究重点和热点。CD4+T 常规饲养一周未见异常后，模型组予 10％卵 淋巴细胞的增殖活化需要两个刺激信号：由T细胞受 蛋 白 (SigmaInc)生理盐水溶液 1ml腹腔注射， 体(TCR)与抗原提呈细胞(APC)提呈的MHC一抗原肽 第 15天时予 5％ 卵蛋 白生理盐水溶液雾吸入激发 复合物相结合所产生的第一信号 (识别信号)和 哮喘发作，每次 30min，持续 7d；对照组 以生 由APC表面共刺激分子与T细胞表面相对应受体分 理盐水进行腹腔注射及雾化吸入 。末次激发24h后 子相结合所产生的第二信号 (共刺激信号)。许 处死，每组各 6只行支气管肺泡灌洗 ，剩余取肺 多研究表 明，除了B7．CTLA4／CD28和 CD40／CD40L 组织行病理切片 。 这两对共刺激分子外，OX40及其配体OX40L是又 1．3 试剂及仪器 一 对在T细胞初次和再次应答中发挥重要作用的共 402型超声雾化器 (上海合力医疗器械厂)； 刺激分子 。本文利用BALB／c小鼠建立哮喘模型， 哮喘激发实验玻璃箱 (特制．大小为 10cm ×10cm 检测肺组织中OX40的表达 ，来探讨 OX40／OX40L ×20cm)；离心机 (Heraeus，瑞士)；超薄切片机 这一对共刺激分子在哮喘发病 中的作用 。 与 冰 冻 切 片 机 (L eiCa )：生 物 显 微 镜 (OLYM PUS)；大 鼠抗 小 鼠CD 134(一抗， 1 材料和方法 SeroTeC)；羊抗大 鼠IgG(二抗，深圳晶美)： 小鼠SP超敏试剂盒 (Maixin，Inc) 1．1 实验动物 1．4 支气管肺泡灌洗及灌洗液细胞计数 清洁级 8周龄雌性BALB／cd、鼠，体 18-20g， 1．4．1支气管肺泡灌洗 摘除眼球放血，从颈部剪 由苏州大学生命科学院实验动物中心提供：随机分为 开暴露气管，插入一次性使用静脉留置针 (24