干扰素对肝细胞癌胸苷磷酸化酶表达和细胞凋亡的双重影响.pdfVIP

干扰素对肝细胞癌胸苷磷酸化酶表达和细胞凋亡的 双重影响1 肖永胜，周俭，樊嘉，赵燕，薛琼，刘银坤，叶胜龙，汤钊猷 复旦大学附属中山医院，上海（200032 ） E-mail ：yshxiao@ 摘 要：目的 进一步研究干扰素-α （IFN-α）对人肝细胞癌胸苷磷酸化酶（TP ）表达水平及 细胞凋亡的双重影响。方法 在体内外用一定剂量的 IFN-α 处理人肝癌细胞 SMMC-7721， RT-PCR 检测细胞TP mRNA 表达水平，流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。结果 IFN-α上调 SMMC-7721 细胞TP mRNA 表达水平，呈现剂量依赖性。与未处理组相比，浓度为5000、 10000 U/ml 的IFN-α处理的细胞TP mRNA 表达水平显著升高（P0.05 ），但不同浓度的IFN-α 对细胞凋亡百分比的影响差别不显著。结论 一定剂量的 IFN-α 既能上调肝细胞癌TP 表达 水平，又能抵消TP 表达上调后抑制细胞凋亡的作用。 关键词：胸苷磷酸化酶，干扰素-α，细胞凋亡，肝细胞癌 胸苷磷酸化酶（thymidine phosphorylase TP ）在肿瘤组织内部催化卡培他滨等5-氟尿嘧 啶（5-FU ）的前体药物转化为有细胞毒作用的5-FU，是 5-FU 前体化疗药物发挥作用的关 键酶[1] [2] [3] 。但 TP 同时能抵抗缺氧 、细胞毒性化疗药物 诱导的细胞凋亡。有报道干扰素 （interferon IFN ）能够上调肿瘤细胞内TP 酶的表达[4-6]，同时一定剂量的IFN 又能够诱导肝 癌细胞的凋亡[7,8] 。本文拟进一步研究IFN 对肝细胞癌TP 表达水平及凋亡的双重影响，为临 床联合应用IFN 与卡培他滨防治肝癌提供实验依据。 1. 材料 人肝癌细胞系SMMC-7721 引自第二军医大学，用含10%小牛血清的RPMI 1640 培养 液，在 37℃、5%CO2 的培养箱中培养和传代。干扰素-α （IFN-α）：由罗氏公司上海分公司 惠赠，商品名：罗扰素，水剂，450 万U/ml 。 2. 方法 1. 不同浓度IFN-α对SMMC-7721 细胞TP mRNA 表达水平的影响：将对数生长期的细胞 铺于6 孔板，培养24 h ，弃去原培养液，分别加入含IFN-α的新鲜培养液，IFN-α的浓 度分别为0、10、100、1000、5000、10 000 U/ml，继续培养24 h ，每个浓度2 个孔。 利用半定量RT-PCR 方法[9]检测细胞TP mRNA 表达水平。重复上述实验3 次。 2. 不同浓度IFN-α对SMMC-7721 细胞凋亡水平的影响。将对数生长期的细胞铺于6 孔板， 培养24 h ，弃去原培养液，分别加入含IFN-α的新鲜培养液，IFN-α的浓度分别为0、 10、100、1000、5000、10 000 U/ml，继续培养24 h ，每个浓度2 个孔。利用流式细胞 仪检测IFN-α对细胞凋亡的影响[9] 。重复上述实验3 次。 3. 结果 1. IFN-α对SMMC-7721 细胞TP mRNA 表达水平的影响（图 1）：SMMC-7721 细胞应用 IFN-α处理后，TP mRNA 表达水平逐渐升高，具有剂量依赖性。用浓度5000 U/ml 与 10 000 U/ml IFN-α处理细胞，TP mRNA 表达水平显著升高，与未用IFN-α处理组相比， 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20030246052）和上海市教委基金资助项目 （02JG05035）的资助。 -1- 差别具有统计学意义（P0.05 ）。