多重调控病毒基因载体的构建及其体外抗肿瘤活性.pdfVIP

生堡塞墼窆E登盘盍2塑生2旦筮堑鲞筮≥塑￡h鱼』啦!盟：丛型b!塑，!生：堑：塑!：! ·327· ·实验研究· 多重调控病毒．基因载体的构建及其 体外抗肿瘤活性 刘永靖 陈飞虎 苏长青王星华 张琪李林芳钱炎珍钱其军 【摘要】 目的构建一种新型的病毒．基因治疗载体。方法通过克隆技术将人肿瘤坏死因 子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因插入质粒载体pBHGE3的E3区，得到由主要晚期启动子(MLP) 调控的腺病毒质粒pPE3．hTRAIL，再通过与质粒pSGS00在293细胞中进行位点特异性重组得到 EIA、ElB基因分别受hTERT启动子与HRE启动子双重调控的重组增殖型腺病毒，用TCID50方法 测定病毒滴度。通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。利用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测人TRAIL基因的表达。并进行噻唑蓝(MTY)比色法实验检测其杀伤肿瘤细胞的能力。结果 X CNHKS00．hTRAIL的病毒滴度为2．3910”pfu／ml，增殖实验结果证实CNHKS00-hTRAIL可以选择 性地在端粒酶阳性的人肺癌细胞A549中增殖，其所携带的人TRAIL基因在A549中的表达量 (183．12¨g／L)明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad-hTRAIL(24．53卜g／L，P0．01)。 MTr显示CNHK500．hTRAIL对A549的杀伤能力明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad· 备治疗肺癌潜力的新型病毒一基因治疗系统。 【关键词】肺癌；腺病毒；基因治疗；TRAIL Anovel adeno、rirus humantumornecrosisfactor-related tripie-regulatedoncolytic carrying apop- antitumoron cancerinvitro nU exerts efficacy tosis-inducingfigandgene potent lung Yong- Candiothoracic Fei-hu，SU Departmentof Surgery，105thof 胁g’，CHEN Chang-qing，et以．4 Hospital PLA。Hefei230031，China To a adenovirusthehuman 【Abstract】Objectivedeveloptriple·regulatedreplieative carrying TRAIL novel CNHK500-hlrI认IL．MethodsThehumanTRAIL gene．a gene．viraltherapeuticsystem intotIle E3of to thatWas wascloned gene upstream．ofplasmidpBHGE3producepPE3．hTRAILregulated later Wasco．transfected埘tllin293cells bvmajor promoter(MLP)．TheplasmidpPE3．hTRAIL pSG500 recombinationto recombinant adenovirllS bysite—sDecific generate conditionallyreplicating．competent