茶多酚对人脐静脉内皮细胞增殖作用的研究.pdfVIP

茶多酚对人脐静脉内皮细胞增殖作用的研究1 1 12 武红莉 ，陈信义 1 北京中医药大学东直门医院肿瘤血液科，北京（100700 ） 2 教育部、北京市重点实验室（中医内科学），北京（100700 ） Email ：chenxinyi0729@ 摘 要： 目的：采用析因设计的方差分析法探讨茶多酚（TP ）对人脐静脉内皮细胞系 （HUVEC ）生长增殖的影响。方法：采用二因素3×5 析因设计及 MTT 法检测不同作用时 间（24h 、48h 、72h ）及剂量（60、80、120、160、240 µg/ml ）的TP 对HUVEC 的生长增 殖作用，采用倒置相差显微镜观察HUVEC 细胞形态的变化。结果：24h 时，120、160、240µg/ml 组与对照组OD 值有显著性差异；48h 时，80、120、160、240µg/ml 组与对照组OD 值有显 著性差异；72h 时，80、120、160、240µg/ml 组与对照组OD 值有显著性差异(P0.05 或P0.01) 。 24h 、48h 、72h 的IC50 值分别是 184.41、127.70、108.98µg/ml。且TP 作用时间与剂量之间 有交互作用。结论：TP 能抑制HUVEC 增殖且具有量效-时效依赖关系。 关键词：茶多酚；人脐静脉内皮细胞；MTT；析因设计 茶多酚（tea polyphenols,TP ），绿茶的提取物，研究表明其具有抗血管生成作用。血管 内皮细胞是血管生成过程中最基本、重要的角色，抑制内皮细胞增殖的能力在研究中已成为 观察某些抗血管生成药物疗效的有效指标。本研究以人脐静脉内皮细胞为离体研究对象，采 用析因设计方差分析法以期了解TP 对其生长增殖的影响，为寻找新的抗血管生成手段提供 重要的实验依据。 1 材料 1.1 受试样品及试剂 TP(纯度98%)：江西绿康天然产物有限责任公司惠赠，临用前用三蒸水配制成100mg/ml 母液，再用完全培养液稀释成各种实验浓度；噻唑兰（MTT ）粉：Sigma 公司产品，临用前 0.01MPBS 配制成 5mg/ml；DMEM 高塘培养基、胎牛血清(FBS)：GiBCO 公司产品；二甲 基亚枫（DMSO ）：国产分析纯。 1.2 细胞株 人脐静脉内皮细胞（中国典型物种保藏中心CCTCC ）李梢老师惠赠，培养于含10%胎 牛血清、青霉素100u/ml、链霉素100u/ml的DMEM高糖培养液（完全培养液）中，于37℃、 5%CO2条件下培养。 2 方法 2.1 实验分组 对照组加入等倍体积的完全培养液。实验组根据TP作用时间及剂量按3×5设计析因实 验，实验中各因素及其水平如下：分24h 、48h 、72h 3个时间点；以60µg/ml、80µg/ml、120µg/ml、 160µg/ml、240µg/ml为用药剂量。 2.2 TP 对细胞生长抑制效应 3 取对数生长期的HUVEC于96孔板接种，4×10 cells/孔，共三块板；培养12h后吸弃原培 1本课题得到国家自然科学基金资助项目（编号）的资助。 - 1 - 养液，每块板分六组加入培养液（60～240µg/ml 5个浓度的TP组及对照组），每组5个复孔， 每孔100µl；分别继续培养24h 、48h 、72h后吸弃上清，每孔加入不含血清的DMEM培养液200µl 及5mg/mlMTT液20µl ；再培养4h后，弃去上清液加入DMSO 150µl /孔，振荡10min，置于日 本550型全自动酶标仪490nm处测各孔吸光度（OD值）,根据下式计算细胞生长抑制率：细胞 生长抑制率（% ）= （1-OD实验组/OD对照组平均）×100%。 2.3 统计学处理 计量资料样本均数和标准差以 x ±s表示，采用SAS9.0统计软件进行统计分析。数据满 足方差分析条件，实验组与对照组之间采用单因素方