重组腺病毒AdEGFPmdr1转染大鼠骨髓细胞模型的构建.pdfVIP

医学创新 2011年3月 第 鲞箜9 MedicalInnovationofChina,March．2011,Vo1．8No．9 · 1 · 著 · 重组腺病毒 Ad—EGFP—mdr一1转染大 鼠 骨髓细胞模型的构建 陈先锋 刘作金 王晓波 余少鸿 隆洪木 龚建平 栾晓峰 李越 【摘要】 目的 构建转染多药耐药基因一1(muhidrugresistancegene一1，mdr一1)的骨髓细胞。方法 将重组 腺病毒 Ad—EGFP—mdr一1转染大 鼠骨髓细胞 。RT—PCR法和 Westernblot法检测 mdr一1mRNA及蛋 白的表达水 平；柔红霉素排出试验检测转染mdr一1基因后的骨髓细胞有无功能表达。结果 骨髓细胞病毒转染率为30．14％， 存活率为89．25％，转染后骨髓细胞mdr一1的mRNA及蛋白质水平都存在功能性表达，导人的mdr一1表达产物P— gP有药物外排泵功能。结论 转染mdr一1的大鼠骨髓细胞模型的成功构建，为进一步研究肿瘤的多药耐药提供实 验基础 。 【关键词】 多药耐药基因一1； 重组腺病毒； 骨髓细胞． Construction ofrecombinantadenovirusAd—EGFP—mdr一1transfectedbonemarrow cells CHEN Xian一 ng ， uZuo-fin，WANGXiao—bo ，YUShao—hong ，LONGHong—mu ，GONGJian—ping，LUANXiao—feng，LIYue． FulingCentralHospitalofChongqing，Fuling408000，China 【Abstract】 Objecfive Toconstructbonemarrowcells(BMC)transfectedwithadenovirusAd—EGFP—mdr一1 (multidrugresistancegene一1)．Methods BMCweretransfeetedwithrecombinantadenovirus，Ad—EGFP—mdr一1．Ex‘ pressionlevelsofmdr一1mRNAandproteinweredetectedbyRT—PCR，Westernblottinganddaunorubicin(DAM)．Results Thetransfeetionefficiencyoftheviruswas30．14％ ，andthesurvivalrateofBMCwas89．25％ ．Themdr一1mRNA and proteinwerefunctionallyexpressedintransfectedBMC．Theexpressedproduct，P—gP，wasfoundtohaveapumpingfunction inducedbymdr一1．Conclusion Constructingthebonemarrow cellsweretransfectedrecombinantadenovirusAd—EGFP— mdr一1helpstofurtherstudyreversingmultidrugresistance． 【Keywords】 Muhidrugresisatncegene一1；Recombinantadenovirus；Bonemarrowcell 肝癌的综合治疗中化疗是最重要的方法之一，但是 ，临 时还能杀伤肿瘤细胞，但治疗剂量的MMF也会同时造成较 床肝癌化疗往往不甚满意，多药耐药现象的产生是影响化疗 严重骨髓抑制。P—gp是一种能量依赖性药物输 出泵 ，可将 疗效的关键。肝移植是治疗肝癌等终末期肝病 的主要手段 药物泵出细胞而避免药物在细胞内堆积。机体不能耐受超 之一，术后化疗也是防止肝癌术后复发的重要环节 0J。目 大剂量 MMF治疗的关键原因之一，就是骨髓造血细胞因缺 前肝移植术后采用的细胞毒性药物、神经碱钙抑制剂和类固 乏这种 P—gP介导的保护机制 ’。因此，笔者设想通过将 醇的三联用药规范，使得急性排斥反应 (acute