原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
烟草原生质体的分离纯化.pdf
( )
2006年 11月 安徽大学学报 自然科学版 Novem ber 2006
第 30卷 第 6期 Jou rnal of A nhu i Un iversity N atural Science Edition Vo l. 30 No. 6
烟草原生质体的分离纯化
1 2 1 1
江 力 ,孔小卫 ,吴晓杰 ,李少松
( 1. 合肥工业大学 生物与食品工程学院 ,安徽 合肥 230009; 2. 安徽大学 生命科学学院 ,安徽 合肥 230039)
摘 要 :研究从烟草叶片分离原生质体的若干影响因素. 通过酶解法降解细胞壁释放出原生质体 ,
利用离心和蔗糖漂浮法从粗提取液中纯化出原生质体 ,并通过血球计数板计数来比较制备的效果. 结果
表明:酶的种类 、质膜稳定剂 、渗透压稳定剂 、pH 及酶解时间是影响原生质体制备的重要因素. 纤维素酶
( ) 2 +
含量 2% ,果胶酶含量 1% , 2 - N - 吗啉乙烷磺酸 M ES 浓度 50mmol/L , Ca 与甘露醇作为渗透压稳定
剂 , pH6左右 ,温度 28 ℃,酶解时间 4h 时原生质体的分离效果最佳.
关键词 :烟草 ;原生质体 ;分离纯化 ;影响因素
中图分类号 : Q945 文献标识码 : A 文章编号 : 1000 - 2 162 (2006) 06 - 0091 - 04
植物原生质体在生理生化研究、基因表达调控研究、基因定位研究、细胞器制备 、细胞融合 、新品种
培育等方面有重要用途 [ 1 - 4 ] ,诸多因素影响植物原生质体的制备和活力. 本实验以烟草为材料 ,研究细
胞壁降解酶 、渗透压稳定剂 、质膜稳定剂 、pH 等因素对原生质体制备的影响 , 旨在对建立高效的烟草原
生质体再生系统及其遗传操作有参考价值.
1 材料与方法
1. 1 材料及原生质体的制备
( )
供试材料为烟草 N icotiana tabacum L. 品种云烟 85. 取充分展开的叶片 ,用自来水冲洗干净 ,取 2g
(
叶片剪碎 ,加入 20mL 酶液 2 %纤维素酶 , 1%果胶酶 , 0. 2mo l/L 的 CaC l , 50mmo l/L M ES, 0. 6mo l/L 甘
2
)
露醇 28 ℃酶解 3 - 6h. 将酶解后的原生质体悬浮液用 3层纱布过滤 , 600 r/m in离心 5m in. 将沉淀的原生
( )
质体悬浮在 2mL 0. 2mo l/L 的 CaC l ·2H O 中 ,用注射器 装上长针头 向离心管底部缓缓注入 20%蔗
2 2
糖溶液 6mL , 600 r/m in离心 5m in. 在两相溶液的界面之间将出现一层纯净的完整原生质体带 ,纯净原生
质体用 8mL 0. 2mo l/LCaC l
文档评论（0）