小鼠胚胎移植技术方法比较_管彤.pdfVIP

第 18 卷　第 1期 实验动物科学与管理 Vol.18　No.1 2001年3 月 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINSTRATION Mar.2001 小鼠胚胎移植技术方法比较 管　彤, 王凤山, 王　静, 王 军, 于国德, 杨梦礼 (天津市劳动卫生职业病研究所, 天津　300204) 摘要:以近交系小鼠C BL 6J、BDF 小鼠作为供体胚小鼠, 封闭群昆明种小鼠作为代母, 对实验小鼠胚胎移植的三 57 1 种方法, 即:对小鼠受精卵(或2 个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移 植(8 细胞期胚)的方法了进行实验研究, 并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进 一步的探讨, 为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。 关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植 中图分类号:S865.13　文献标识码:A　文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03 　　自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎 1.2 　试剂 的采集技术之后, 很快就完成了早期胚向代母体内 PMSG (pregnant mare serum gonadotropin )、HCG 输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研 (human chorionic gonadotropin)、胚胎移植用 Injection [1] 究 。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及 Medium 培养液、M2 培养基等。 生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育 1.3 　假孕代母的准备 生物学研究, 包括胚胎的发生、发育、突变基因的研 1.3.1　昆明种雄性小鼠的结扎 究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷 为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭 冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究, 均 群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎 需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发 手术, 以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的 [2] 生的阶段不同, 移植部位也不同 。1～2 个细胞期 雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术, 术后备用。 胚胎进行输卵管口移植, 8 细胞期至桑椹期胚进行 1.3.2　制备假孕代母 子宫移植。1992 年, 日本学者Na agata[3] 又报道了 胚胎移植前一日(子宫移植, 前三日)将已施行 经由输卵管壁进行输卵管移植的技术, 以解决移植 输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1 ∶2 中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。 与其雌性小鼠进行同笼交配, 次日检查阴道栓有无, 本文主要是将此三种移植方法引入, 使之在本 以阴道栓形成者作为移植用代母。 实验室成为常规后, 将其应用于实验小鼠并进行了 1.4 　卵的采集 方法上的比较, 重点比较了方法上的难易程度、产仔 1.4.1　超排卵[4] 率、方法选择的前提因素。 取出生后8 ～10 周的C57 BL 6J 及 BDF1 雌性小 鼠进行PMSG 处理(腹腔注射, 5IU 只), 48 h 后进行 1 　材料与方法 HCG 超排卵处理, 方法、剂量相同,HCG 处理14 ～ 17 h 后可进行受精卵的采集(子宫移植, 为HCG 处理 1.1 　实验动物