补肾健脾药物血清对大鼠成骨细胞TGF—1表达的影响.pdfVIP

维普资讯 · 100 · 辽宁中医杂志2005年第 32卷第 2期 补肾健脾药物血清对大鼠成骨细胞TGF—1表达的影响 任艳玲。郑洪新，杜 松 (辽宁中医学院，辽 宁 沈阳 110032) 摘 要 ：目的：研 究补肾健脾中药吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞转化生长因子 (TGF)．B1表达的调节作 用，探讨补肾健脾 中药治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制 。材料与方法：采用胶原．胰蛋 白酶 消化 法获得新生大 鼠 的成骨细胞 (r()B)，用改 良钙钴法测定碱性磷酸酶(ALP)i~42,以鉴定 r()B；以补肾健脾药物吸收后药物血清，加入体外培 养的rOB中进行培养，分别以RT．PCR法及Westernblot法检测 rOB的 TGF—B1mRNA和蛋 白的表达。结果 ：补肾健脾 中药吸收后药物血清可上调 rOB的TGF-~31的mRNA和蛋 白的表达，并呈一定的浓度依赖性 (P0，01)。结论：补肾健 脾 中药通过诱导rOBTGF．p1的信号转导分子TGF．B1的mRNA和蛋 白的表达而促进 rOB的增长与分化。 关键词 ：成骨细胞 ；TGF—B1；信号转导；补肾健脾 中图分类号 ：R285．5 文献标识码 ：B 文章编号：1000—1719{2005)02—0100—03 转化生长 因子 一p(TGF一13)是 一种对 骨有 强 大调 节 至 10％、20％浓度 的含药血 清 ，经 0．22t~m 滤膜抽 滤 除 作用 的生长 因子 ，对 骨形成 具有 明显促进 作用 ，是骨 形 菌 。 成 、骨重建过 程 中的关键 调节 因子 …1。本研 究 旨在 观 1．4 成 骨细胞 的培养 将 新生 SD 大 鼠 (中国医科 大 察补 肾健脾 中药对 大 鼠成 骨细胞 (r()B)TGF—B的细胞 学实验动物 中心)放入 75％酒精 中浸泡 消毒 15min，无 内信号转 导分 子 TGF—p1表达 的调 节 ，探 讨 补 肾健脾 菌操作 下取 出颅 盖骨 ，除去 附着 的血 管及 结缔组 织 。用 中药 防治绝经后骨质疏松症 的作用机制 。 Hank’s溶 液 清 洗 3次 ，剪 成 1ram3大 小 的碎 块 。用 1 材 料与方法 Hank’s溶 液 清 洗 3次 ，加 入 8倍 于 骨 碎 块 体 积 的 1．1 主要试剂及 药 品 补 肾健脾 中药主要 成分 为熟 0．25％胰 蛋 白酶 ，于 37℃ 水浴 中预 消化 30min，期 间不 地黄 、鹿角胶 、人参 、杜仲 等 ，由辽宁省 中药新药研制开 时摇动 ，弃去消化液 ，再 用 Hank’S溶 液清洗 干 净后 ，加 发 中心制剂 室制 成颗 粒 剂 ，每 克 含 生药 3．2g；兔抗 大 入 8倍 于骨块体积 的 0．02％I／型胶 原酶 ，于 37℃水浴 中 鼠 TGF—p1一 抗 (SantaCruz公 司)，即用 型 SABC免 疫 消化 5次 ，期 间反 复振摇 ，每 次 20min，弃 除前两 次 消化 组 化 染 色 试 剂 盒 (博 士 德 公 司 )，DAB 显 色 试 剂 盒 (博 液 ，取 最 后 3次 消化 液 ，1000rpm，离 心 10rain，弃 上 清液 ， 士德 公 司 )，TRIzol(GIBCoBRL公 司)，TaKaRaRNA 所得 白色沉 淀物 即 为制 得 的成骨 细胞 样 细胞 团，用 含 PCR Kit(AMV)Ver．2．1试 剂 盒 、100bpDNA Lad— 10％胎 牛 血 清 (H )的 DMEM 培 养 液 重 悬 细 胞 至 derMarker(TaKaRa公 司 )， actin引 物 (由 TaKaRa 2×10 ／mE的