王晓燕结肠癌中NGX6抑制EGFR_Kras_JNK_cJun_cyclin_D1信号通路的研究.pdfVIP

维普资讯 I’—；： PIZlI! … Ⅵ Vw．pibb．ac．cn 结肠癌中NGX6抑制EGFR／K．ras／JNK／c．Jun／ cyclinD1信号通路的研究术 王晓艳 ， 沈守荣 “刘 芬 彭 娅 李桂源 范松青 ∞ ()中南大学湘雅三医院消化内科，长沙410013； 中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，长沙 410078； 中南大学湘雅二院病理科，长沙410011) 摘要 候选抑瘤基因NGX6具有抑制结肠癌增殖和转移的作用 ，研究表明其为表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactor receptor，EGFR)的负性调控因子，并可下调JNK通路中重要分子MADD(MAP-kinazeac~vatingdeathdomain)的表达，其抑 瘤机制是否与抑制EGFR介导的JNK信号通路的活性有关?在已建立的转染NGX6的细胞模型基础上，借助蛋白质印迹 (Westernblot)和免疫组化方法在细胞和组织水平检测NGX6转染前后EGFR／K-ras~／4-K／c．Jun／cyclniD1信号通路中重要蛋白 质的表达．结果表明，NGX6转染后结肠癌细胞HT．29在裸鼠体内成瘤明显受抑，差异有统计学意义．Westernblot结果显 示，在结肠癌细胞中NGX6可明显下调EGFR、K-ras、p-JNK、e-Jun和cyclniD1的表达；进一步采用Westernblot和免疫 组化法验证NGX6在体 内对上述关键分子表达的影响，发现NGX6可抑制裸 鼠移植瘤组织中EGFR、K-ras、p-JNK、c．Jun 和cyclniDI的表达，与体外结果一致．上述研究表明，NGX6在结肠癌中主要通过抑制EGFR介导的JNK通路的活性而发 挥其抑瘤作用，该研究为深入探讨NGX6的机制提供了重要的实验依据． 关键词 结肠癌，NGX6基因，EGFR，JNK信号通路 学科分类号 Q257，R735 NGX6基因(GenBank：AF188239)是我们 自主 发挥其抑瘤作用． 克隆的候选抑瘤基因，生物信息学预测NGX6位 本文首先在 结肠癌细胞 中采用蛋 白质印迹 于染色体的9p21～22区域，cDNA全长 2134bp， (Westernblo0检测NGX6转染前后 EGFR介导的 基因编码 338个氨基酸，具有两个跨膜结构，一个 JNK信号通路中关键蛋白的表达变化，然后，应用 EGF样功能域，多个N．糖基化位点和多个酪氨酸 Westernblot和免疫组化法在裸 鼠移植瘤组织中进 磷酸激酶位点[1]．初步研究表明，NGX6在 73．5％ 一 步验证．该研究为NGX6负性调控EGFR相关 的结肠癌组织及93．8％有转移的结肠癌组织中表 信号通路的机制研究提供重要的实验依据． 达下调或缺失，提示NGX6可能具有抑制结肠癌 1 材料与方法 增殖、转移的功能2【】，该结果在细胞水平和裸 鼠移 植瘤水平得到了进一步证实3[】．应用基因芯片和基 1．1 主要试剂 因差异表达分析技术研究发现，NGX6可下调结肠 胎牛血清、胰酶、DMSO购 自华美生物工程 癌细胞HT一29中JNK ／SAPK通路中的重要激活蛋 公司；聚丙烯酰胺、双丙烯酰胺、TritonX一100、过 白MADD表达 3倍 以上 ，并可抑制 EGFR和 cyclinD1的表达 ，延缓结肠癌细胞周期 由G0／G1 ·国家重点基础研究发展计划(973)(2006CB910503)，国家 自然科学 期到 S期的进程4【】．相关研究也发现NGX6在鼻咽 基金 30370801，教育部博士学科点专项