水稻磷酸酯酶2A基因蛋白的原核表达载体构建表达与纯化.pdfVIP

贵 州 科 学 27 (2 ) : 45 - 49 , 2009 Gu izhou S cience 水稻磷酸酯酶 2A 基因蛋白的原核表达载体构建 、表 达和纯化 吴 　华 　严定平 　罗越华 ( ) 海南大学农学院 ,海口　570228 摘 　要 　利用 PCR 技术 ,从水稻品种 日本晴幼穗 cDNA 中扩增磷酸酯酶 2A 的基因 ORF 片段 ,并将其克隆入原核表达载体 p GEX - 6p - 1中构建重组质粒 p GEX - 6p - 1 - PP - 2A ,经限制性内切酶酶切鉴定以及测序结果表明成功构建了原核表达载 体 p GEX - 6p - 1 - PP2A ,转化 E. coli JM 109 并通过终浓度为 0. 4mmol/L 的 IPTG诱导 ,表达出 39kD 的 GST - PP2A 融合蛋白, 并用蛋白亲和层析柱 GSTrap FF对表达产物进行纯化 ,为下一步的研究打下了实验基础 。 关键词 　磷酸酯酶 2A , 载体构建 ,重组蛋白,原核表达 ( ) 中图分类号　Q786, S511