TrisHCl及其他几种缓冲液配方.docVIP

Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？ Tris：三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应? ???Tris为弱碱，在室温（25下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。? ?? ?由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。有机合成中间体。在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。? ?? ?Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度??1 M Tris-HCl配制量? ? 1L配制方法1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。pH值? ?? 浓HCl7.4? ?? ???约70 ml7.6? ?? ???约60 ml8.0? ?? ???约42ml4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。1.5 M Tris-HCl (pH8.8)? ?? ?? ?? 组份浓度??1.5 MTris-HCl配制量? ? 1 L配制方法??1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓HCl调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。TE即Tris-EDTA buffer（10mM Tris，1mM EDTA，pH7.4 pH7.6 pH8.0）常用分子生物学试剂，用于DNA的溶解等。配制1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)? ??组份浓度：??100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA配制量： 1 L配制方法： 量取下列溶液，置于l L烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)? ?? ???100 ml500 mM EDTA(pH8.0)? ?? ???20 ml 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。?3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4.室温保存。