植物组织离体培养-1.docVIP

植物组织离体培养-概念和基础理论(1) 摘要：植物组织培养技术是现代生物技术的重要部分，植（Plant Tissue Culture；In Vitro Culture）是现代生物技术的重要部分，是利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、花、果实等）组织（）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体在无菌和适宜的人工培养基及适宜的光照、温度、气体等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的新兴学科和技术，养是生物技术在农业上应用较成熟、较广泛，产业化程度也较高。我国始于20世纪70年代，80年代的葡萄、草莓、苹果、香蕉、大蒜等的成功应用和产业化，90年代后期的芦荟和洋兰使我国的试管苗产业得到了极大的发展，已形成了规模生产能力的新兴产业——植物组培业亦称植物。　1.植物组织培养的概念、类型与特点 1.1.植物组织培养的概念 植物组织培养（plant Tissue culture）是指用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称。一般而言就是利用植物体的器官、组织或细胞，通过无菌操作接种于人工配制的培养基上，在一定的光照、温度和通气等条件下进行培养，使之生长发育的技术称为植物组织培养，狭义而言就是对植物的组织（如分生组织、表皮组织、薄壁组织等）及培养产生的愈伤组织（callus）实行离体培养的技术体系，因培养的植物材料已离开母体，也称之为离体培养（In vitro culture）。它的理论基础就是植物细胞全能性的理论（cell Totipotency），指植物有核细胞能够发展成为一棵完整植株的潜能，就是说正常生物体的每一个细胞，都含有该物种的全部遗传信息，在一定的条件下都具有发育成一株完整个体的潜在能力。组织培养的理论、实践、技术和方法不断完善和发展，已形成独具特色的专业技术；在实验技术上建立了较完整的实验程序，已成为一种重要和精细的实验技术；组织培养已广泛应用于生物学的许多分支学科，并取得丰硕的成果；在农业领域乃至其它领域的应用并达到商业化水平，更显示出这项技术的先导性、实用性和经济价值。 1.⒉ 植物组织培养发展简史 组织培养技术的蓬勃发展是应用科学理论到技术开发实践的成功范例，它的发展一般认为可以分为五个阶段： 探索阶段（1902-1929年）：20世纪初，在德国植物学家Ｔ.schleiden和Ｔ.Schwann提出Haberlandt提出了高等植物的器官和组织为许多细胞组成的观点，以及植物细胞全能性的理论，即植物的体细胞，在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖，发育成完整植株的潜在能力。他首次发表了植物离体细胞培养实验的报告。1912年，Haberlandt的学生Kotte和美国的Robins在根尖培养中获得了组织培养的成功。KotteRobins用含无机盐、加葡萄糖或果糖的琼脂培养基，培养了长度为1.45-3.75厘米的豌豆、玉米和棉花的茎尖，形成了一些缺绿的茎和根。 组培方法和定义的建立阶段（1930-1939年）Haberlandt的实验之后，直到1934年美国学者White由番茄根建立了第一个活跃生长的无性繁殖系，并反复转移到新鲜培养基中继代培养，使根的离体培养实验获得了真正的成功，并在以后28年间培养了1600代。 这之后，White又以小麦根尖为材料，研究了光、温度、通气、pH、White培养基。与此同时，Gautheret(1934)在研究山毛柳和黑杨等形成层的组织培养实验中，提出了B族维生素和生长素对组织培养的重要意义，并于1939年连续培养胡萝卜根形成层获得首次成功。同年，White由烟草种间杂种的瘤组织，法国学者Nobecourt由胡萝卜均建立了与上述类似的连续生长的组织培养物。因此Gautheret，White和Nobecourt，WhiteSkoog和崔 瀓（南开大学教授、著名植物生理学家），在烟草茎切段和髓培养以及器官形成的研究中发现，腺嘌呤或腺苷可以解除培养基中生长素(IAA)对芽形成的抑制作用，而能诱导形成芽，从而明确了腺嘌呤与生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一。即这一比例高时，产生芽；这一比例低时，则形成根，相等则不分化。在寻找促进细胞分裂的物质过程中， Miller等人于1956年发现了激动素。激动素（kinetin,KT,带有呋喃环的腺嘌呤）可以代替腺嘌呤促进发芽，并且效果可增加几万倍。从而使控制器官发生（reganogenesis）的激素模式变为激动素与生长素的比例关系。这方面的成功发现，有力地推动了植物组织培养的发展，为植物组织培养中完整植株的再生（regeneration）建立了理论基础。1952年，morel和MartinMuir 把单细胞放在一张铺在愈伤组织上面的滤纸上