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细胞工程复习题 第一章：绪论 1.细胞工程是指按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术。 狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。 细胞培养（cell culture）和组织培养（tissue culture）都属于体外培养（in vitro culture），是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。是细胞工程的最基本技术。 3.动物细胞工程发展史 1、细胞融合现象的发现2、动物细胞培养技术的建立，1907年，Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞，并观察到从中长出的轴突细胞（神经纤维），他的工作被认为是动物细胞培养开始的标志；3.细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生4、动物克隆技术的建立 4动物细胞工程的应用 动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体)2、新品种培育3、试管动物与婴儿4、组织工程5、珍稀动物资源的保存与保护 5.将目的基因在器官或组织中进行特异性高表达的基因动物称为动物生物反应器 第二章 1 .动物细胞工程实验室的设置 无菌操作室（接种室）功能：细胞筛选、接种、培养基无菌制备 要求：密封、防尘、防霉 规划：更衣间、缓冲间、操作间 培养与观察室 功能：细胞培养、观察 要求：清洁，防尘 规划：观察室，培养室 制备室 功能：培养基的初制备、提取工艺的操作、细胞培养的上游和下游技术操作 要求：清洁，防尘 清洗灭菌室 功能：培养皿的清洗、灭菌和无菌纯水的制备 要求：清洁、防尘 储藏室功能：保存细胞、无菌培养基、常用液体以及消毒后的器皿等 要求：清洁，防尘 2.细胞计数法是用血细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数目，用以测定细胞增殖和调整细胞浓度的一种方法。细胞计数的原则：”S”型计数，遵循数上不数下数左不数右的原则。 细胞生长曲线是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，以培养时间（d）为横坐标、细胞密度为纵坐标所做出的曲线。 3.细胞贴壁率又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力，和部分底物材料的相容性。 4.细胞活力测定方法：MTT比色法、 CCK-8 法 5.细胞培养活体染色方法：1）碱性活性染料：噻嗪类（次甲基蓝、甲苯胶蓝）、哑喷类（量焦油蓝、量焦油紫）、吖嗪类（中性红、詹纳斯绿）、三酚苯甲烷类（甲基紫、维克多利亚蓝） 酸性活性染料:台盼蓝、刚果红、吡咯蓝） 6.支原体污染的检测方法：相差显微镜观察、荧光染色法观察 、电镜检测 、培养检测 7.污染后解决方法：：使用抗生素、加温处理、使用支原体特异性血清、其他方法 第四章 1.接触抑制定义：细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。 2.密度抑制：细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，数量仍在增多，但当细胞密度进一步增大时，培养液中营养成分的减少，细胞营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止 细胞永生化也称不死性，是细胞获得持续生长增殖能力的特性。而恶性细胞不仅能长期增殖生长并有异体接种致瘤性。 3.细胞系（cell line）是指由原代培养经初步纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。 4.细胞株（cell strain）是指细胞系经进一步的克隆化，得到的由单一细胞组成的群体。 细胞系（cell line）是指由原代培养经初步纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。 5.细胞培养的常用液体:水--新鲜制备的纯水或三蒸水 平衡盐溶液--Hank’s、PBS液等维持渗透压平衡 消化液---胰蛋白酶、EDTA-Na及胶原酶溶液、 消化酶抑制液---含血清培养液、大豆胰酶抑制剂 pH调整液----NaHCO3、HEPES溶液 抗生素液---青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素等 谷氨酰胺补充液--谷氨酰胺溶液，注意其很不稳定 6.传代细胞培养方法 1）贴壁生长的细胞：消化法传代、直接吹打或用硅胶软刮 2）悬浮细胞：直接吹打、自然沉降法 细胞的冻存原则：慢速冷冻、保存温度低 细胞的复苏原则快速解冻 细胞同步化培养方法： 1）选择细胞同步化：M期细胞震摇脱落法、离心洗脱法、梯度沉降法 2）诱导细胞同步化法：血清饥饿法（G1）、异亮氨酸营养缺乏法（G1）、DNA合成抑制剂阻断法（S）、秋水仙素阻断法（M） 8.细胞的冻存要点： ①消化细胞（同前），将细胞悬液收集至离心管中。 ②1000rpm离心10分钟，弃上清液。 ③沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。 ④将悬液分