PGC-1α-shRNA慢病毒载体对牙髓干细胞分化的影响.pdfVIP

口腔生物医学2011年6月 (第2卷第2期) OralBiomedicine，Vo1．2，No．2，Jun．201l · 67 · [文章编号] 1674—8603(2011)02-0067-04 PGC一1OL—shRNA慢病毒载体对牙髓干细胞分化的影响 王子露 ，曹 灵，郑阳玉，杨迷芳，王舒舒，于金华 (南京医科大学 口腔医学研究所，江苏 南京210029) [摘要] 目的：构建过氧化物酶体增殖物激活受体 辅激活因子 1(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptor eoactivator1， PGC一1)短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)慢病毒表达载体，体外评价其对牙髓干细胞 (dentalpulpstemcells，DPSC)分 化的影响。方法：根据 shRNA设计原则，设计合成用于体内干扰PGC一1仅编码序列的shRNA，重组入慢病毒载体PLKO．1。将 构建正确的PLKO．1／PGC一10一【shRNA感染 DSPC，实时荧光定量PCR检测PGC一1ol的表达，细胞化学染色和实时荧光定量 PCR 检测其对DPSC分化的影响。结果：测序证实重组质粒构建成功；体外试验表明，DPSC转染了PGC一1一shRNA后 PGC一1 表达 水平降低，干扰效率达81％，而且细胞钙化结节增多，牙本质涎磷蛋白和 I型胶原的表达明显上调，与对照组相比具有显著性 差异 (P0．05)。结论：慢病毒介导的PGC一1—shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达 ，并影响牙髓干细胞的分化。 [关键词] 短发夹RNA；慢病毒载体 ；过氧化物酶体增殖物激活受体 ^v辅激活因子 1ot；牙髓于细胞 [中图分类号] Q786 [文献标识码] A [doi] 10．3969／j．issn2011．02．003 EffectsofPGC-1 genesilencingbyPGC-1c~-shRNA mediatedwithlentiviralvectoronthedifferentiationofdentalpulpstem cells WANGZi—lu，CAOLing，ZHENGYang—yu，YANGMi-fang，WANGShu—shu，YUJin—hua．(InstituteofStomatology，NanjingMedicalUni— versity，Nanjing210029，China) Correspondingauthor：WANGZi—lu，Email：wzl710@ 163．com ，Tel：0086—25 [Abstract] Objective：ToconstructalentiviralplasmidofRNAinterferenceofperoxisomeproliferatorsactivatedreceptor^ycoaetiva— tor1 (PGC一1)gene，andevaluatetheinterferenceeffectofPGC一1一shRNAoffthedifferentiationofdentalpulpstemcells(DPSC)in vitro．Methods：AccordingtothetargetsequenceanddesignprincipleofshRNA ，theshorthairpinRNA wasdesignedandsynthesized tointerferethePGC一1otexpression，andtheshRNA duplexwasligatedintothePIKO．1vector．DPSC wastransfeetedwithPLKO．1／ PGC一1仅一shRNA ，andtheexpressionlevelofPGC一1仪wasdetectedbyrealtimeRT—PCR；cytochemicalstainingsandrealtimeRT—PCR wereusedtoinvestigatetheditterentiationpotentialofDPSC．Results：Therecombinantvectorwassuccessfullyconstructedandcon— firmedbysequencing．Invitroexperimentdemonstra