NRSF慢病毒干涉载体的构建及功能初步检测.pdf

Research hcraeseRsrepaP il Biophys幻s Rl!然豢嚣展and Ⅵ—哪．pibb．ac．gn NRSF慢病毒干涉载体的构建及功能初步检测毒 杨印祥 李艳华 刘庆斌张赛男 陈 琳 吕 洋 白慈贤 南 雪 裴雪涛” (军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室，北京100850) 体．通过RNAi序列设计软件进行NRSF干涉片段及脱靶对照片段的设计，然后构建慢病毒干涉载体．包装产生慢病毒干涉 等方法检测NRSF的干涉效果及其下游基因的表达情况，观察干涉NRSF后胰岛素启动子报告载体荧光素酶活性的变化．构 在胰岛细胞发育分化中的调控作用． 关键词神经元限制性沉默因子，神经元限制性沉默元件，RNA干涉，胰岛素 学科分类号Q291，Q789 特异性基因在非神经元细胞中的表达Is]．在神经元 神经元限制性沉默因子(neuron．restrictive silencerfactor，NRSF／RE—l 分化过程中，NRSF表达下降，而受其调控的绝大 silencingtranscription 多数基因随神经细胞分化而表达逐渐增多，这些基 kll的Cys2／His2 factor，REST)是一分子质量为116 因编码的蛋白质涉及离子通道、神经递质、生长因 型锌指蛋白，属于Gli．Kruppel样转录因子家族【”． NRSF最初是在神经系统中被广泛研究的，它作为子、激素及调控轴突生长、囊泡运输及释放的因子 阻遏蛋白出现在胚胎、神经前体细胞及非神经细胞 等．NRSF表达的下调是保证神经元正确分化的重 中并阻遏神经性基因的表达．其作用机制是NRsF要基础，也是神经元表型维持所必需的，用REST— 蛋白和靶基因的神经元限制性沉默元件 silencer NRSF所抑制的目标基因，并有效诱导神经干细胞 (neuron·restrictiveelement，NRSE／repressor 向神经元分化嘲． element．1，REl)豫3】相结合，随后，NRSF的N端 尽管胚胎起源不同，胰岛细胞和神经细胞却有 结构域能结合mSin3A／B[41，C端结构域能结合 CoI也ST【习，形成的共阻遏复合体将组蛋白去乙酰着大量的相似性．他们具有相似的发育机制及相似 的表型及功能特点，比如B细胞也存在电兴奋性， 化酶(histonedeaeetylase，HDAC)及相关蛋白招募 到靶基因的启动子区，使靶基因的组蛋白发生去乙 其胞吐作用与神经突触小泡释放神经递质的过程相 酰化，从而对某些神经特异性基因的转录发挥阻遏 似，两者对激素刺激的反应相似，除了都表达转录 作用．除此之外，也有报道甲基化机制参与实现 NRSF的阻遏作用[03．另外，非编码dsRNA(double—·国家高技术研究发展计划(863)领域重大专项资助项目 s打anded (2006AA02A10刀，国家重点基础研究发展计划(973) RNAs)也能和NRSF相互作用从而调控 NRsF靶基因的表达即． 一通讯联系人． 大量研