壳聚糖在小鼠体内的组织分布和排泄.pdfVIP

壳聚糖在小鼠体内的组织分布与排泄1 1 2* 3 胡锦珍 ，张家骊 ，夏文水 1 江南大学生物工程学院，江苏无锡（214122 ） 2 江南大学医药学院，江苏无锡（214122 ） 3 江南大学食品学院，江苏无锡（214122 ） E-mail：9989card@163.com 摘 要：目的:研究分子量50 万、脱乙酰度为90%的壳聚糖给小鼠灌胃后在体内的吸收、分 布及排泄。 方法: 用异硫氰酸荧光素对壳聚糖进行标记，确定荧光标记壳聚糖在小鼠组织 中的检测方法，测定小鼠口服荧光标记壳聚糖后在体内各组织中的分布，并检测给药后72h 内药物从尿和粪中排泄情况。结果：获得纯化的荧光标记壳聚糖，各组织和排泄样品中低、 中、高浓度的回收率、精密度和稳定性均符合方法学技术要求。给小鼠灌胃后壳聚糖在血清 中浓度非常低，体内主要分布在肾脏，肝脏其次。尿液中壳聚糖被分解，粪便中壳聚糖以原 形排泄。结论：壳聚糖在心、肝、脾、肺、肾和肠中均有分布，胃部没有吸收，主要经肾脏 排泄。高分子量壳聚糖在小鼠体内的组织分布的研究为其进一步的开发具有指导价值。 关键词：壳聚糖；荧光标记；HPLC；组织分布 中图分类号：R931.77 1. 引言 壳聚糖（chitosan ）是一种可降解吸收的天然高分子材料，由甲壳素经浓碱水解脱去乙 酰基后得到。壳聚糖含有游离氨基，能与稀酸结合生成胺盐而溶于稀酸，其安全无毒，具有 良好的生物相容性，在医学、食品、纺织、造纸、化工、环保等领域都具有广阔的应用前景 [1-2] 。目前，壳聚糖在医学领域的研究发展非常迅速，越来越多证据表明壳聚糖具有降低胆 固醇、抑制脂肪吸收和提高免疫力等多种生理活性功能，对壳聚糖药物代谢动力学方面的研 究也在逐渐开展，如 Zeng, L. [3]等用四种不同分子量的壳聚糖对小鼠灌胃后比较了其在体内 的吸收与分布，指出壳聚糖体内吸收的程度与分子量大小和水溶性密切相关; Hiraku Onishi[4] 等研究了水溶性壳聚糖在小鼠体内的生物降解和分布等。但是对于水不溶性壳聚糖在体内的 分布排泄研究报道较少，本文采用异硫氢酸荧光素标记壳聚糖的方法，研究其给小鼠灌胃后 在体内的吸收、分布及排泄情况，为进一步研究其药效学及制剂的设计和应用提供基础数据。 2. 材料与仪器 2.1 试剂与药品 壳聚糖（脱乙酰度为 90% ，相对分子质量为 5×105 ），由江南大学食品学院提供；异硫 氰酸荧光素（FITC ），购自 Sigma 公司。 2.2 动物 清洁级雌性昆明小鼠，6 周龄，体重 18-25g，由上海斯莱克实验动物中心提供。 动物许可证号：SCXK(沪)2007-0005 2.3 仪器 高效液相色谱仪 ( 美国安捷伦公司 ); VICTOR3TM 1420 Multilabel Counter( 美国 1 本课题得到国家自然科学基金项目资助。项目名称是“壳聚糖降脂机理的研究”，项目批准号。 - 1 - PerkinElmer 公司);FD-5 真空冷冻干燥机(上海市离心机械研究所);752 型紫外可见分光光度 计(上海光谱仪器有限公司),81-2 恒温磁力搅拌器（上海闵行虹浦仪器厂），R-110-25–14K 透 析袋（上海绿鸟科技有限公司） 3. 方法 3.1 FITC 对壳聚糖的标记 壳聚糖溶于 0.1M 醋酸，配制 1%的壳聚糖溶液，缓慢加入0.5 倍体积的甲醇，搅拌均匀， 加入一定 FITC 脱水甲醇溶液，混匀，30℃避光搅拌反应24h 后，1 M NaOH 调节至 pH9.0 ， 透析 3 天，每天换一次去离子水 2L，至透析袋外的溶液中无荧光吸收，标记壳聚糖经过量 乙醇不断清洗，至样品中不含游离的荧光素，冷冻干燥。标记的壳聚糖用凝胶渗透色谱进行 分析，测定标记率。壳聚糖与荧光素的反应控制质量比为 100：1。 3.2 色谱分析 3.2.1