利用分枝杆菌的重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌的方法研究.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 2011，27 (6) ChineseJournalofZoonoses 539 文章编号：1002—2694(2011)06—0539—04 利用分枝杆菌的重组工程系统将 TAP标签敲人 耻垢分枝杆菌的方法研究* 赵丽丽 ，夏 强 。，赵秀芹 ，万康林 摘 要 ：目的 利用 pJV53质粒编码 的分枝杆菌重组工程系统将 TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基 因组。方法 将 pJV53 质粒转入耻垢分枝杆菌，使其表达重组蛋 白，制备带有重组蛋 白的感受态细胞；从质粒 pBS1479中扩增出tap片段，从质粒 pSMT3中扩增hyg片段，从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5端非编码 区片段AASF5和aasf基因下游3 端非编码 区片段AASF3，利用重叠PCR将 以上 4个片段拼接在一起，形成最终的敲入片段A5THA3；将构建好的敲入片段转 入感受态细胞 ，使其重组入耻垢分枝杆菌基 因组 中，PCR和 DNA 测序鉴定敲入效果。结果 重叠 P