斑马鱼胚胎中受Nodal信号调控基因的鉴定.pdfVIP

ResearchPapers 研究报告 生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics 2007,34(6):595~603 斑马鱼胚胎中受 信号调控基因的鉴定* Nodal ** 孙智慧 孟安明 (清华大学生物科学与技术系发育生物学实验室，蛋白质科学教育部重点实验室，北京 100084) 摘要 Nodal信号在脊椎动物胚胎发育的中内胚层诱导、左右不对称性的建立、神经外胚层沿前后轴线的分化等方面起着重 要的作用.为鉴定受Nodal信号调控的基因，特别是那些转录因子基因，通过将来自squint过量表达、缺失Nodal信号的 MZoep突变体或野生型30%外包期胚胎的RNA与Affymetrix斑马鱼寡核苷酸芯片杂交.发现与野生型样本相比，在squint过 量表达的样本中，265个转录本的表达显著增强 (logratio1)，111个转录本的表达显著减弱 (logratio 1)；在 样本 2 2 - MZoep 中，表达显著增强的 (logratio1)转录本有1495个，表达显著减弱 (logratio 1)的有550个. 过量表达使26个转录 2 2 - squint 因子基因的表达增强，11个转录因子基因的表达减弱；另一方面，MZoep突变体中表达增强的转录因子基因为69个，表达 减弱的转录因子基因为30个.这些结果为进一步研究Nodal信号的转导机理和生物学功能提供了有益的数据. 关键词 斑马鱼，胚胎，Nodal，基因芯片，转录因子 学科分类号 Q7 Nodal是TGF 超家族的成员.在脊椎动物胚 本项研究主要想通过基因芯片技术鉴定斑马鱼早期 ! 胎发育过程中，Nodal是关键的中胚层和内胚层诱 胚胎发育过程中受Nodal信号调控的转录因子基 导信号，在左右不对称发育中起着重要作用，也参 因，为将来深入研究Nodal信号实现其生物学功能 [1] 与了神经外胚层沿前后轴线的分化 .斑马鱼早期 的分子机制打下基础. 胚胎中表达有 2个 Nodal基因，即 squint和 1 材料与方法 [2] ，它们在囊胚的中内胚层前体细胞中表达 . cyclops 给单细胞胚胎注射 或 的mRNA，可 1.1 材料 squint cyclops 野生型斑马鱼为Tuebingen品系. 突变品系 以增强胚盾(embryonicshield，相当于爪蟾的组织 oep [2～5] tz257 中心)特异性基因和其他中内胚层基因的表达 . 为oep .用于RNA提取的Trizol为Sigma公司产 在 和 基因都发生了突变的 ； 品.体外制备mRNA采用Roche公司的Cap-Scribe squint cyclops squint cyclops双突变体胚胎中，原肠作用开始时缺少胚 试剂盒.斑马鱼基因芯片为AFFYM