产琥珀酸重组大肠杆菌的构建和发酵性能.pdfVIP

2010 16 6 ): 851~857 2010-12-25 应用与环境生物学报 ， ( Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2010.00851 产琥珀酸重组大肠杆菌的构建和发酵性能* ** 曹剑磊 周 丽 张 梁 王正祥 石贵阳 （江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室 无锡 214122） 摘 要 琥珀酸是一种重要的化工产品，微生物发酵法生产琥珀酸具有广阔的应用前景 . 野生大肠杆菌厌氧发酵产 物中琥珀酸含量低，且有大量副产物. 为构建高产琥珀酸的重组大肠杆菌，阻断代谢旁路，利用Xer/dif 重组酶系统 对Escherichia coli CICIM B0013进行代谢途径的调控研究 . 结果显示，敲除了包括乙酸激酶和磷酸乙酰转移酶基因 （ackA-pta ）、乳酸脱氢酶基因（ldhA ）、丙酮酸甲酸裂解酶基因（pflB ）、乙醇脱氢酶基因（adhE ）等琥珀酸合成竞争 途径中关键酶基因的重组大肠杆菌菌株E. coli CICIM B0013-1040 ，其发酵液中琥珀酸成为主要产物得到积累；进一 步对其PTS系统进行修饰并适当增强PEP羧化酶基因（ppc ）表达剂量，成功获得一株具备较强琥珀酸生产能力的菌 株E. coli CICIM B0013-1050 （pTH-ppc ），该菌株厌氧转化葡萄糖36 h ，琥珀酸产量达到36.2 g/L ，生产强度为1.01 g L-1 h-1 ，葡萄糖-琥珀酸转化率为64.3% ，发酵液经高效液相色谱（HPLC ）检测，无乳酸、乙酸、甲酸、乙醇生成. 图7 表4 参 18 关键词 琥珀酸；重组大肠杆菌；代谢调控；基因敲除；Xer/dif 重组酶系统 CLC Q78 : TQ921 Construction and Fermentation of Succinate-producing Recombinant Escherichia coli* CAO Jianlei, ZHOU Li, ZHANG Liang, WANG Zhengxiang SHI Guiyang** (Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China) Abstract Succinic acid is an important chemical product, and its production based on microbial fermentation has a great prospect for industrial application. There are a large number of by-products besides succinic acid in the component of wide type Escherichia coli anaerobic fermentation production. In order to construct high-yield succinate producing strain of recombinant E. coli , metabolic pathway regulation was performed on a strain of E. col