粉尘螨变应原第2组分基因的原核表达及生物信息学分析.pdfVIP

胡友莹等 粉尘螨变应原第 2组分基因的原核表达及生物信息学分析 第 6期 533 doi：10．3969／j．issn．10013—484X．2011．06．013 粉尘螨变应原第2组分基因的原核表达及生物信息学分析① 胡友莹② 周 鹰 杨 李 王运刚 崔玉宝③ (盐城卫生职业技术学院检难医学教研室，盐城 224006) 中国图书分类号 11184．39 文献标识码 A 文章编号 looo-484x(2Ol1)06-0533．07 [摘 要] 目的：克隆并原核表达粉尘螨变应原第2组分重组蛋白，鉴定其变应原性，分析其分子特征，为制备用于临床 诊治的变应原奠定基础。方法：提取粉尘螨T0talRN!，根据国际基因库 (AB195580)设计并合成引物，经RT-PCR合成Derf2全 长基因，与pMD19一T载体连接后，热转化至 E．coliJM．109；将测序正确的Derf2基 因与pET28a(+)Vector连接，转化 BI21 (DE3)，IPTG诱导表达；经镍琼脂糖凝胶 FF亲和柱层析，收集各阶段洗脱峰用梯度透析法进行复性 ，Westernblot鉴定重组蛋 白 的