高效液相色谱仪器讲稿.docVIP

液相色谱根据目前市场情况主要分进口和国产两大类，进口主要有美国产Waters（实验室存有Waters1525价格：35.6W）、安捷伦（实验室存有Aglient1200价格34.5W）、塞尔泰、戴安、日本岛津等系列；国产有大连依利特、大连江申、上海上分、上海伍丰、浙江温岭、北京温分等系列。 液相色谱仪结构主要由贮液器、高压输液泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。 1．贮液器：使用泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。　”装样 针先排汽泡。 进样 搬injected 计时约10s，否则会倒流 图标消失，拔针 洗针（用溶剂洗） 4．色谱柱使用注意事项： 柱子使用pH范围。C18反相柱一般适用的样品pH范围在2~8，故一定要精确调节好缓冲液的pH值和样品的pH值，并注意缓冲液的浓度不得超过0.02mol/L。 柱子使用压力范围。正常状况下流速会逐步上升，柱压也随之逐步上升直至维持较稳定的范围，最高压力不超过4000Psi，注意结合每根柱子的使用说明，每天都要记录柱压。 柱子使用流速范围。根据不同色谱柱设定相应的流速。 柱子方向不能接反（否则会冲坏固定相）。 使用缓冲液时，做完样品后应立即用超纯水冲洗管路及柱子1小时，然后用甲醇冲洗40分钟以上，以确保整个管路及柱子保存于有机溶剂中。 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相（如甲醇等），因为纯水易长霉。 5．柱温箱:控制温度，Waters1525一般设置柱温30~40℃，高于室温5℃，但必须打开示差检测器；Aglient1200可设低于室温10℃，最高可设定80℃。 6．检测器： UV检测器是HPLC中应用最广泛的检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。它灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度均不敏感，梯度洗脱时，还会产生漂移。开机操作L，进样量80μL），每次进样时宜保持相同的打针速度，切记不能将气泡打入，进样完成后，迅速将进样阀搬至inject状态，对话框消失后，再拔针，进样针立刻用溶剂清洗至少5次（样品溶剂如果是水相，用纯水清洗，有机相则用甲醇清洗），进样前如样品量够得话，建议再用样品润洗进样针。 样品检测结束后，按停泵图标停泵，在紫外检测器面板上按shift+1关闭紫外检测器的氘灯（延长灯的寿命），然后开始洗柱子，C18反相柱用超纯水：甲醇（95：5已脱气）冲洗40 min（流速从0.5 mL/min慢慢加至1.0mL/min，增加流速过程需注意压力变化，不能超过限压，Symmetry型号的最好不能超过3000 PSI）。在此过程需另外超声一瓶色谱纯的甲醇。下一步清洗将超纯水换成甲醇（已脱气），然后用甲醇：甲醇（50：50）冲洗40 min（流速调节同第一步的清洗过程）。 柱子洗好后，停泵，待压力降至0后，打开参比阀，先用超纯水再用甲醇清洗进样口、进样针、泵孔，切记不能将空气打入进样口（至少5个注射器体积）。 先关闭Breeze软件和电脑，再关柱温箱、泵、检测器，不必关闭UPS（断电保护器）。 关机完成后，将仪器盖好防尘罩，整理实验台面，倒废液（两个都要倒干净，倒卫生间），关空调，关好门窗，并对仪器使用情况和仪器状态如实进行登记。 注意事项： 如遇停电，UPS能维持半小时，应立刻停止测样，停泵，再换超纯水：甲醇（95：5已脱气）洗柱子30 min。 正常状况下流速会逐步上升，柱压也随之逐步上升直至维持较稳定的范围，最高压力不超过4000Psi，注意结合每根柱子的使用说明，每天都要记录柱压。 更换柱子时应先让柱前的管路通过流动相5min左右，然后再接上柱子，注意柱子的方向，并时刻观察压力。 C18反相柱一般适用的样品pH范围在2~8，故一定要精确调节好缓冲液的pH值和样品的pH值，并注意缓冲液的浓度不得超过0.02mol/L。 柱温箱一般设置在30~40℃，高于室温5℃，使用柱温箱一定要打开示差检测器。 使用示差检测器，每更换一个条件就必须先purge示差检测器参比池10 h，流动相要混合在一个瓶子脱气。 从反相柱换至正相柱的步骤：甲醇 异丙醇（0.2 mL/min冲洗10 h） 正己烷（1.0 mL/min冲洗4 h）。 不能对色谱方法，通道，数据等做删除处理。 防止流动相流完，过滤头一定要浸没在流动相中。 实验结束后确定整个仪器、色谱柱都保存在有机相中。 缓冲液或超纯水必须每天更换新的，使用缓冲液要先用超纯水：甲醇（95：5已脱气）过渡20 min。缓冲液要过0.45μm的滤膜。 一般情况下，Breeze软件