果蝇唾腺染色体制片方法的改进.pdfVIP

52 生 物 学 通 报 2011年 第 46卷 第 6期 果蝇唾腺染色体制片方法的改进 赵锦慧 刘 中华 (周 口师范学 院生命科学系 河南周 口 466000) 摘要 对果蝇唾腺染色体制片方法进行 了改进 ，结果表明：改 良苯酚品红染色液配好 15d 后使用 ，浓度为6％时，染色5～8min可以获得染色体横纹和背景清晰的图像 ；通过改变脂肪剥 离的顺序 即染色后再去 除脂肪 ，压片效果明显提 高。 关键词 果蝇唾腺染 色体 改 良苯酚品红 浓度 时间 脂肪 中国图书分类号 ：Q343．2 文献标识码 ：B 黑腹果蝇是普遍应用于遗传学 的果蝇 ．也是 A液 ：1．5g碱性品红溶于 50mL70％的酒精 奠定经典遗传学基础的重要模式生物之一…，其三 中(此溶液长期保存)。 龄幼虫是观察唾腺染色体的理想材料 。果蝇唾腺 B液 ：取 5mLA液加入 45mL5％的苯酚水 染色体横纹形态特征 的特异性和稳定性 ，因此成 溶液 (此液 2周 内使用)。 为鉴定染色体结构改变 的 良好材料 。果蝇唾腺染 C液 ：取 B液 45mL加入 6mL37％的甲醛溶 色体制片与观察是遗传学教学 中重要 的基础实 液。 验 ，但传统的制片方法往往 出现唾液腺易丢失 、染 分别 吸取 0．8mL、lmL、1．2mL、1．4mLC液 ， 色体臂不能充分伸展 、染色效果不理想等 问题 ，许 再分别加入 0．2g山梨醇和 45％醋酸定容到 20mL 多学者对其进行 了改进E2~5]。本试验在前人研究的 即配成 4％、5％、6％、7％的改 良苯酚品红染色液 。 基础上 ，对果蝇幼虫的培养 、脂肪 的剥离和染色等 4)唾腺染色体 的制备及观察 。 环节进一步改进 ，以获得更好 的制片效果 。 ①唾腺的剥离 参照王华峰 等剥离唾腺的 1 材料与方法 方法 。 1．1 唾腺染色体的材料 黑腹果蝇三龄幼虫。 ②脂肪的剥离 传统的方法是剥离唾腺后立 1．2 饲养幼虫 的材料 玉米粉一糖一琼脂一酵母 即去除脂肪 ，本试验做 了改进 ，染色完成后再进行 粉培养基 。 脂肪的剔 除。 1．3 染色液 改 良的苯酚 品红染色液 。 ③酸解、漂洗、染色处理 先用 1mol／L的 1．4 方法 HC1处理腺体 23min，然后用蒸馏水漂洗 3—4 1)培养基的配制 。 次 ，最后用不 同浓度 的改 良苯酚 品红染色液染色 A：红 糖 62g，琼 脂 6．2g，加水 380mL，煮沸 (本试验设置 了3个染色时间处理 ：3～5rain、8～ 溶解。 10rain、13-15min)。 B：玉米粉 83g，加水 380mL，加热搅拌均匀 。 ④压片、观察与显微摄影 将盖玻片轻轻地 A和 B混合加热成糊状后 ，加 5mL丙酸 ，分 放下 ．覆上