黄瓜芽黄突变相关基因ClpP克隆及植物表达载体构建.pdfVIP

中国雇学c墨提 201l，27(16)：146-150 ChineseAgriculturalScienceBulletin 黄瓜芽黄突变相关基因CIpP克隆及植物表达载体构建 朱伟伟 ，陈远 良 ，陈 芳 ，高剑峰 (石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000；新疆石河子蔬菜研究所，新疆石河子 832000) 摘 要：为了获得黄瓜中ClpP基因的eDNA全序列，研究其与黄瓜芽黄突变现象的关系，采用TRNzol法 提取芽黄突变的黄瓜叶片总RNA，并以其为模板反转录合成eDNA第一链 。根据NCBI预测的黄瓜 ClpP基因序列设计并合成 1对特异引物，通过PCR扩增得到 目的条带后测序，并构建植物表达载体；成 功获得黄瓜 中ClpP基因的eDNA全序列，并提交到NCBI。该基因编码区全长495bp，共编码氨基酸 158 个。预测其理论等 电点为5．22，理论蛋 白质分子量为41．00356KOa，编码 的蛋 白包含S14CIpP2保守 结构域，无信号肽。通过与其他植物Clp蛋 白酶的氨基酸序列比对发现与毛茛属植物的Clp蛋 白酶同源 性较高。并成功构建了以CaMV35S为启动子的植物表达栽体pBI121一ClpP。黄瓜 中ClpP基因的eDNA 全序列的获得说明该基因在黄瓜中确实存在 ，这是首次克隆得到了黄瓜 中的ClpP基因的cDNA全序 列。 关键词：ClpP；植物表达载体 ；栽体构建 中图分类号 ：Q94．336 文献标志码 ：A 论文编号 ：201l一0743 IIheCloneofCIpPRelatingtoVirescentMutantinCucumberand theConstructionofPlantExpressionVector ZhuWeiwei，ChenYuanliang。，ChenFang，GaoJianfeng (ShiheziUniversityCollegeoil Science，ShiheziXi~iang832000； ：ResearchInstituteofVegetablesofShiheziinXinjiang，ShiheziXi~iang832000) Abstract：InordertoobtaintheeDNAofClpPgeneandanalyzetherelationshipsbetweenc／pegeneand virescentmutationofcucumber，thetotalRNA wasextractedrfom virescentmutationalbudsofcucumberby TRNzolmethod．ThetotalRNA wasused astemplateto synthesisthefirstchain ofeDNA byreverse transcriptionapproach．Onepairofprimerswasdesignedandsynthesizedtoamplifyanaim fragmentaccording torelativelyClppgenesequence．Theaim rfagmentwasinsertedtoaplantexpressionvectoraftersequenced． ThecompleteeDNA sequencewasgainandsubmittedtoNCBIdatabase，whichlengthwas495bpandencode 158aa．Thepredictedproteinwasabout41．00356Kda．anditsisoelectriepointwasabou