抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立.pdf

Chinese1．ourrlaIofNew Drugs2012，21(4) 抗紫杉醇单克隆抗体的制备及 E】LISA检测方法的建立 赵 凯 ，孙立新 ，孙宇石 ，周东坡 (1黑龙江大学生命科学学院，微生物黑龙江省高校重点实验室，哈尔滨 150080； 2农业微生物技术教育部工程研究中心，哈尔滨 150500；3黑龙江大学校 医院，哈尔滨 150080) [摘要] 目的：制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接 ELISA检测方法。方法 ：用琥珀酸酐法将紫杉醇 (taxo1)与牛血清白蛋 白(BSA)偶联制成全抗原taxol—BSA，采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗 原进行鉴定；以taxol—BSA免疫 Blab／c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2／0进行融合，经间接ELISA法筛选、融 合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选 出单克隆抗体杂交瘤细胞株 ，并对单克隆抗 体 的特异性进行鉴定；用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水，应用辛酸一饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时，对间接 ELISA法反应条件进行 了优化。结果 ：获得 了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名 为taxo]．A1，taxo1．-A2和 taxo]．A3；taxol—A3株腹水效价为 1：128000，属于IgG2b亚型；建立的问接 ELISA法检 测条件为 15txg·mL 抗原、4℃包被过夜、1％ BSA封闭1h，PBS做抗体稀释液 ，单抗反应时间为30min，酶 标二抗作用时间1h，10％浓硫酸终止反应。结论 ：获得 了特异性 的抗紫杉醇单克隆抗体并建立 了间接 ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接 ELISA检测方法，为从 内生真菌生物合 成紫杉醇发酵液 中迅速 、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定 了基础。 [关键词] 紫杉醇 ；内生真菌 ；taxol—BSA；抗紫杉醇单克隆抗体 ；酶联免疫吸附试验 [中图分类号]R979．1 [文献标志码]A [文章编号]1003—3734(2012)04—0436—07 Preparation ofmonoclonalantibodyagainsttaxoland establishmentofELlSA detection method ZHA0 Kai’，SUN Li—xin ，SUN Yu—shi，ZHOU Dong—po ’ (1LaboratoryofMicrobiology，CollegeofLfieScience，tleilong~angUniversity，Harbin150080，China； 2EngineeringResearchCenterofAgriculturalMicrobiologyTechnology，MinistryofEducation， Harbin150500，China；3HosphalofHeilongjiiangUnivershy，Harbin150080，China) [Abstract] 0bjective：Topreparemonoclonalantibodies(McAb)againsttaxolandtoestabhshanindirect enzyme—hnkedimmunosordentassay (ELISA)methodforrapidlydetectingtaxo1．Methods：Taxolwascoupled withthecarrierproteinbovineserum albumin (BSA)topreparethecompleteantigentaxol—BSAbysuccinctan— hydridemethod．The prepared taxol—BSA wasidentified by ultravioletscanner and thin layerchromatography (TLC)．Blab／cmiceWereimmunizedwithtaxol—BSA．ThesplenocytesoftheimmunizedBlab／cmicewerefused withSP2／0mydomacellsbyPEG 4000，andselectedwithHATmedium．A