DNA芯片制作原理及其杂交信号检测及方法.pdfVIP

《生物工程进展》2000 ,Vol. 20 ,No. 2 技术 方法 DNA 芯片制作原理及其杂交信号检测方法 张天浩 　张春平 　张光寅 (南开大学光子中心 ,天津 　300071) 陈瑞阳 (南开大学生命科学院 ,天津 　300071) 摘要 　文章讨论了DNA 芯片的制作原理和杂交信号的检测方法 。依其结构 ,DNA 芯片可分为两 种形式 ,DNA 阵列和寡核苷酸微芯片 。DNA 芯片的制作方法主要有光导原位合成法和 自动化点 样法 。DNA 芯片与标记的探针或 DNA 样品杂交 ,并通过探测杂交信号谱型来实现 DNA 序列或 基因表达的分析 。适应于 DNA 芯片的发展 , 同时出现了许多新型的杂交信号检测方法 。主要有 激光荧光扫描显微镜 、激光扫描共焦显微镜 、结合使用 CCD 相机的荧光显微镜 、光纤生物传感器 、 化学发生法 、光激发磷光物质存储屏法 、光散射法等 。 关键词 　DNA 芯片 　分子杂交 　信号检测 ( ) ( 　　DNA 芯片 DNA Chip 又被称为生物芯片 bio 的 ,将核酸或核酸片段按照一定顺序排列在固相支 ) ( ) logical chip 、DNA 阵列 DNA array 或寡核苷酸微 持物上组成密集的分子阵列 。按照其结构基本上可 ( ) [9 ] 芯片 oligonucleotide microchip 等 。这项技术是 由 分为两种类型 : Ⅰ型 ,将待测 DNA 分子样品固定 美国旧金山以南的 Santa clara 的一个新兴生物公司 在固相支持物上并与一系列游离的标记探针杂交 , Aff ymetrix 首先发展起来的[1 ] 。S. P. A Forder ( 现 杂交探针或是单一的或是混合的; Ⅱ型 ,按照预先设 ) 为 Aff ymetrix 公司总裁 及其同事于 90 年代初发明 定顺序将寡核苷酸固定于固相支持物上再与标记的 了一种利用光刻技术在固相支持物上光导合成多肽 DNA 样品进行杂交 , 由已知的寡核苷酸序列确定被 的方法[2 ] ,并在此基础上于 1993 年设计了一种寡核 检测的DNA 样品。通过检测标记信号的分布谱型 苷酸生物芯片[3 ] ,直至 1996 年制造出世界上第一块 ( Pattern) 得到分子杂交情况 ,并由计算机分析处理 。 商业化的DNA 芯片[1 ] 。在此期间国际上掀起了一 DNA 芯片一般只有 12 平方厘米 ,在这样大小的空 片 DNA 芯片设计的热潮 , 出现了多种类型的 DNA 间内需要排列几百甚至上百万个单元 。因而 DNA 芯片技术 。DNA 芯片在产生的短短几年时间内技 芯片制作是一个复杂而精密的过程 ,主要有以下两 术不断完善 ,现已经显现出在基因序列分析 、基因诊 种方法 。 断、基因表达研究、基因组研究、发现新基因及各种 第一种方法是光导原位合成法[3 ] 。具体方法 病原体的诊断等生物医学领域中的应用价值[4 —8 ] 是在经过处理 的载玻片表面铺上一层连接分子 DNA 芯片制造技术充分结合并灵活运用了寡核苷 (linker) ,其羟基上加有光敏保护基团 ,可用光照除 ( ) 酸合成 , 固相合成 ,PCR 技术 ,探针标记 ,分子杂交 , 去 ,用特制的光刻掩膜 photolio