SPF环境中实验动物微生物质量控制.docVIP

SPF环境中实验动物微生物质量控制 1 SPF 改建的SPF环境工程经验收合格后，即可进行全面的清扫、洗刷和消毒。清除所有的杂物，将需要的笼具及其它用具（主要为卫生洁具）妥善放置，用适宜浓度的中性洗涤剂和清水彻底洗刷地面、墙壁、天花板、笼具及洁具，然后用适宜浓度的消毒液（如0.25%的过氧乙酸）彻底擦洗SPF环境内的上述每一部份,妥善安装饲养室高效过滤器及排风口滤膜,通风运行24h以上后,封闭所有送排风口和人员进出口,摆放好各种需进行灭菌的用具和笼架,根据SPF环境的体积,按15ml/m福尔马林加7.5g高锰酸钾计算出药量,对SPF环境进行多点福尔马林熏蒸消毒48h,然后通风运行72h以上。消毒后的SPF环境经江苏省实验动物质量检测二站（负责环境设施检测）按国标GB 14925-2001实验检测合格后，该SPF环境即开始正式运行。并从中国科学院上海实验动物中心（国家啮齿类实验动物种子中心）引进所需品种（系）的大小鼠进行生产繁殖。 2 SPF环境运行期间的维持性消毒和灭菌 SPF环境消毒灭菌后空气及环境中是无菌的，但正常运行并饲育动物后，设施内微生物数量及种类就逐渐增加，而控制设施内微生物数量和种类的方法就是进行维持性消毒和灭菌。灭菌是杀灭所有活的微生物，而消毒仅指杀灭有害微生物，有些物品必需灭菌，有些操作仅为消毒。 2．1消毒剂的选择 过氧乙酸及戊二醛对细菌繁殖体及芽胞均有良好的杀灭作用，但戊二醛杀灭细菌芽胞的时间稍长。过氧乙酸浓度以0.25%为宜，而戊二醛则以2%较适合。因此常规消毒我们选用过氧乙酸和戊二醛。而传递渡槽的消毒使用0.25%的新洁尔灭或0.2%的碘伏进行，每周更换一次。 2．2 消毒与灭菌方法的选择 2．2．1 空气消毒：由于压缩喷雾消毒其雾滴细小，均匀，接触面大，消毒效果较好，因此在SPF环境内空气消毒时采用压缩喷雾消毒的方法。压缩机为华冠移动式空气压缩机（V-0.13/12.5）工作压力为1.25MPa,将适宜浓度的消毒液装入喷枪内,喷枪距消毒目标50cm左右,按照由里向外,由上至下的原则,按50ml/m的用量对空气均匀喷雾,消毒频率与工作人员进入SPF环境相同,一般以每周2-3次为宣。 2．2．2 地面、墙壁及动物笼架的消毒：我们采用表面喷雾消毒及用消毒液擦拭消毒相结合的方法：即天花板、墙壁较高部分用喷雾消毒的方法，墙壁较低部分和笼架首先清扫灰尘，然后用适宜浓度的消毒液擦拭消毒，地面首先必须清除粪便、垫料及灰尘，用适宜浓度的消毒液拖地消毒，消毒频率以每周2-3次为宜。 2．2．3 传递窗物品的消毒：对传递窗的物品采用喷雾、擦拭消毒与紫外线消毒相结合的方法：即首先将待消毒物品表面用适宜浓度的消毒液行喷雾、擦拭消毒后，再放入传递窗，打开紫外灯消毒15miu，再按标准化操作程序（SOP）传入SPF环境。 2．2．4饲料灭菌：清洁级以上级别实验动物理想的饲料，应是双层小包装并经Co灭菌的全价颗粒料。经传递窗进入SPF环境，这样使用方法便且污染机会少、保存时间长、营养损失少，但价格相对较昂贵。因此，我们采用的对于特殊品系的大小鼠，如近交系统Lewis大鼠、近交系NJS小鼠、突变系db/-小鼠、转基因小鼠GT-ROSA及nEGFP待使用Co灭菌的全价颗粒料，其他常规品种（系）的大小鼠生产繁殖和实验（SD大鼠、WiStar大鼠、 ICR小鼠及各种实验后观察的大小鼠）使用普通饲料，经适当包装后进行预真空高压灭菌，灭菌后由双扉消毒锅后门进入SPF环境，灭菌条件为121°C 15min，灭菌后的饲料中某些营养素有所下降，主要是维生素和蛋白质的含量。因此，在饲料加工时，应与饲料生产厂家协调，在生产时补加适量的营养成份，也可在饲养管理过程中自行补饲适量鸡蛋、麦芽、葵花籽等物质，补充 由于灭菌所导致的营养损耗。另外对灭菌后的饲料定期检测灭菌效果，通过采样接种血琼脂平板，37°C培养72h时，观察结果必须为阴性。 2．2．5垫料灭菌：垫料和笼器具一样，是大小鼠生产、繁育和使用不可缺少的并且是十分重要的载体材料。关于大小鼠垫料国内研究相对较少，开发的品种也不多，尽管国家标准对实验动物垫料有一定的要求，但可操作性较差。大部分单位使用的垫料是锯木屑或刨花，由于木材种类不一，气味各异，相互混杂，不易分离，加之木屑和刨花作为加工厂的废品，一般无良好的贮存场所，保存时间长短不一，霉变、虫蛀、野鼠做窝等时有发生，是非常重要的微生物污染源。因此，在选用垫料时，对有特殊气味、霉变、昆虫滋生、有明显野鼠生活痕迹的垫料不能使用。应与木材加工厂联系协调好，将不同材质的木屑和刨花分开存放，及时运回、晒干、包装，并妥善贮藏，垫料在使用前需经预真空高压灭菌，灭菌条件可选择121°C 30min，杀灭垫料中微生物。由于采用预