大鼠来源脂肪干细胞的分离培养及其分化能力的检测.pdfVIP

第33卷第6期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．33No．6 2012年 11月 JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences) Nov．2O12 大鼠来源脂肪干细胞的分离培养及其分化能力的检测 姬文晨 ，张越林 ，张永涛 ，孟发财 ，谭可可 ，胡守业 (1．西安交通大学医学院第三附属医院，陕西省人 民医院神经外科 ．陕西西安 710068； 2．西安交通大学医学院第二附属医院骨科 ，陕西西安 710004) 摘要 ：目的 分离、培养及鉴定 SD大 鼠来源脂肪干细胞 ，为后续实验选取合适 的种子细胞奠定基础。方法 切取 SD 大鼠腹股沟处皮下脂肪 ，利用酶原消化合并差速贴壁 的方法获得细胞 ，在倒置相差显微镜下观察细胞形态和增殖特 征，测定其生长 曲线，进行冻存复苏实验。第 3代细胞在成骨诱导液作用下向成骨方向分化，进行 I型胶原染色、碱性 磷酸酶染色、茜素红染色 ；使用成脂诱导液诱导其向成脂方 向分化 ，进行油红 0染色 。结果 从大 鼠脂肪组织获得的 细胞 ，呈成纤维细胞样生长 ；经成骨诱导液培养后 ，表现 出成骨细胞特性，I型胶原染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色 均呈阳性 ；经成脂诱导液培养后 ，表现 出脂肪细胞特性，油红 0染色后 ，胞浆 内可见脂肪滴 。脂肪干细胞在液氮 中冻 存 2个月复苏后，其生长增殖活性和多向分化能力没有明显降低。结论 成功分离和培养大 鼠脂肪干细胞，获得的细 胞增殖旺盛 ，具有多向分化潜能，为后期运用组织工程技术修复组织损伤 ，提供 了坚实的基础 。 关键词 ：组织工程 ；大 鼠；脂肪干细胞 ；成骨诱导；成脂诱导；分化 中图分类号 ：R651．2 文献标志码 ：A 文章编号 ：1671—8259(2012)06—0693-05 Isolationandcultureofratadipose—derivedstem cells and thetestoftheirdifferentiation capacity JIW en—chen ，ZHANG Yue—lin ，ZHANG Yong—tao ， MENG Fa—cai。TAN Ke—ke ，HU Shou—ye (1．DepartmentofNeurosurgery，ShaanxiProvincialPeople’sHospital，Xi’an 710068； 2．DepartmentofOrthopedics，theSecondAffiliatedHospital，M edicalSchoolof Xi’anJiaotongUniversity，Xi’an710004，China) ABSTRACT：Objective Toisolate，cultureandidentifyadipose—derivedstemcells(ADSCs)fromSDratssoas toprovideatheoreticalbasisforlaterexperimentswhicharetoselectsuitableseedcells．Methods Adiposetissues wereisolatedfrom theinguinalfatofSD rats．Bycombiningzymogendigestionwithdifferentialvelocityadherent method to obtain cells， the morphology and proliferation characteristicsof the cells were observed under th