彩鲫ran基因原核表达蛋白多克隆抗体的制备.pdfVIP

维普资讯 第36卷 第2期 淡 水 渔 业 2006年3月 Vo1．36 No．2 FreshwaterFisheries Mar．2006 彩鲫 ran基因原核表达蛋 白多克隆抗体的制备 李常健，蒋琼凤 (湖南科技学院生命科学与化学工程系，湖南永州 425006) 摘 要：采用SDS—PAGE分离纯化彩鲫 (Carassiusauratusgibelio)ran基因编码 区eDNA全长序列的原核表达蛋 白，并以此为抗原免疫家兔，制备了相应的多克隆抗体；Westernblotting结果表明，该抗体效价为 1：1000，具有 较高的特异性。并从抗原蛋白相对分子质量 、每次注射蛋白量、注射方式、注射途径等诸方面对该技术的要点 进行了介绍。 关键词：彩鲫 ；rna基因；原核表达蛋白；多克隆抗体 中图分类号：s917；Q959．403 文献标识码：A 文章编号 ：1000—6907一(2006)02—0003—03 Preparation ofM ulticlonalAntibodyagainstExpressedProtein ofColorCrucian CarpranGeneinE． coli LIChang-jian，JIANGQiong—feng (DepartmentofLifeSciencesandChemicalEngineering，HunanInstituteof Sceinceand Engineering，Yongzhou，China 425006) Abstract：Theproteincodedbythefull—lengtheDNA sequenceofrangenefrom colorcruciancarp(Carassiusauratus gibelio)expressedinE coliwasseparatedandpurifiedbySDS—PAGEinourstudy．Moreover，theexpressedprotein Was appliedtoimmunizerabbitsnadcorrespondingmuhiclonal antibodywasprepraed．Western blottingresultsindicated thattheprepraedantibodyhadthehightiter(1：1000)nadhighspecificity．Moreover，thekeysofthistechniqueincluding therelativemoleculramassofnatigen，thequnatityofproteinsineachinjection，procedureofinjection，andapproaches ofinjectionwerealsointroducedinthispaper． Keywords：crucina carp(Carassiusauratusgibelio)；rna gene；prokaryoticexpressionprotein；muhiclonalnatibody 鱼类是脊椎动物中物种多样性最丰富的动物类 1 实验材料和方法 群，因其具有许多优 良特性而成为细胞和发育生物 学研究的良好模式动物 I2J。为了对鱼类基因的表 1．1 表达蛋 白的分离纯化 达特征及其功能进行深入研究 ，常需要首先对 目的 1．1．1 菌体破碎 基因编码区或其部分编码