胰岛素样生长因子Ⅰ对三维培养兔关节软骨细胞增殖和表型的影响.pdfVIP

维普资讯 第 二 AcadI军Sec医M杏i1M学ed学Un报iv2005Apr；26(4) ． · 418 · · 论 著 · 胰岛素样生长因子 I对三维培养兔关节软骨细胞增殖和表型的影响 吴剑宏 ，王秋根 ，张秋林 ，陆晴友 ，王万宗 ，张素贞 (1．第二军医大学长海 医院骨科 ，上海 200433；2．长海 医院血管外科) [摘要] 目的 ：研究胰岛素样生长因子 I (IGF—I)对藻酸盐凝胶三维培养条件下免关节软骨细胞的影响。方法 ：利用机械 与酶消化的方法获得均一性 的兔关节软骨细胞 ，在单层培养条件下增殖至P代 ；将P?代细胞高密度条件下转入藻酸盐凝胶培 养介质 ，进行三维培养 ，另一组在进行三维培养 的同时，在培养液 中加入 IGF—I 50ng／ml，绘制备组细胞生长 曲线，并与单层 培养对照组细胞进行 比较。将培养细胞行 Ⅱ型胶原免疫组织化学检测 ，H—E染色观察细胞形态。进行不 同浓度 IGF—I作用 下的三维培养软骨细胞 MTT检测，观察 0、25、50、75、100ng／mlIGF—I对三维培养软骨细胞 备时间点的促增殖作用。结 果 ：IGF—I可 明显刺激三维培养条件下关节软骨细胞增殖及集落形成；不同浓度 的 IGF—I均可促进关节软骨细胞增殖，以 50ng／ml浓度 时D 值最高 。培养 6周后从凝胶体系 中收获细胞 的软骨特异性 Ⅱ型胶原表达水平较转入三维体系前未见降 低。结论 ：IGF—I可 明显刺激藻酸盐三维培养条件下 的关节软骨细胞增殖及集落形成 ，且细胞表型稳定 。 [关键词] 胰岛素样生长因子 I；关节；软骨细胞；三维培养；藻酸盐；细胞增殖；表型 [中图分类号] R684 [文献标识码] A [文章编号] 0258—879X(2005)04—0418-04 EffectsofIGF-Ionproliferationandphenotypeofthree-dimensionallyculturedrabbitarticularchondrocytes WU Jian-hong ，WANGQiu—gen ，ZHANGQiug—lin ，LUQing—you ，WANGWan—zong ，ZHANGSu—zhen!(1．Departmentof Orthopaedics，ChanghaiHospital。SecondM ilitaryM edicalUniversity，Shanghai200433，China；2．DepartmentofVascularSur gery，ChanghaiHospita1) -[ABSTRACT] Objective：ToexploretheeffectsofIGF—Iontheproliferationandphenotypeofthreedimensionallycultured rabbitarticularchondrocytes．M ethods：Theculturedarticularchondrocytesof4-week old rabbitswereobtainedreleasedby mechanicaldissectionandenzymedigestion．Thechondrocyteswerefirstreplicatedundermonolayercultureconditionuntilthe secondgeneration，andthensuspendedintheaqueoussodium alginatebeadswithhighdensity．Thechondrocyteswerecultured inDulbeccosmodifiedEaglemedium