大肠杆菌重组菌生产极端耐热木聚糖酶的研究.pdfVIP

新疆农业科学 ， （专刊）： $$ ! U E VM/WMC/9 Q9LM5X;)XLC; A5MP/5PN 大肠杆菌重组菌生产极端耐热木聚糖酶的研究 ， ! ! ! 娄 恺 ，于安峰 ，邢新会 （ 清华大学化工系生物化工研究所，北京 ； 新疆农科院微生物研究所，新疆乌鲁木齐 ） !# !$$$% # %’$$$$ 摘 要：将含有来自于嗜热网球菌（ ） 编码极端耐热木聚糖酶基因 的表达 !#$%’()*+ $,-.)/,(*) ()*+ , ! -./+ 载体 转化大肠杆菌 （ ），获得重组菌 ，目的基因可表达出有活性且 012 3 4+5 0+#,-.#,1 #( +6! 41’ 0 2 #( 4+! 耐 的木聚糖酶。 发酵培养基的较佳组成为（ ）：葡萄糖 ， 、 、 、 7$8 0 2 #(4+! 9: ; $ = ?; ’ @9AB $ , ?C?; $ , * · 、 和 。在工程菌培养的对数生长前期加入终浓度为 的异丙基 =C DB E B ! , % F DB ’ ,$ =C?; $ , ! GGH;: ; 硫代 半乳糖苷（ ）进行诱导，对菌体生长无阻碍作用，木聚糖酶酶活在菌体生长的后期达到最高， 3 3 4 3 ID2J ! 利用优化的培养基在不加入ID2J 的情况下木聚糖酶酶活仍维持在很高的水平。 关键词：耐热木聚糖酶；大肠杆菌；嗜热网球菌；基因工程；发酵 木聚糖酶（， 木聚糖水解酶， ），可将 ， 木聚糖水解为木二糖、木二糖 ! 3 3 4 3 1? ’ , , !, % 3 ! 3 ! ! 以上的寡聚木糖及少量的木糖和阿拉伯糖，它在制浆造纸工业、饲料工业及食品工业等领域具有很大的 应用潜力和价值。目前，木聚糖酶基因异源表达的受体菌主要为大肠杆菌（ ）及酿酒酵母 0+#,-.#,1 #( （ ），前者用于细菌木聚糖酶基因的表达，后者用于真菌木聚糖酶基因的表达。大 31##,1.)% #-+#-.-4+1- 肠杆菌表达系统遗传背景清楚，适用范围广并且稳定性高，具有大量可供选择利用的克隆与高效表达 载体，发酵工艺成熟，因此，可以用于大规模发酵生产。以下将研究嗜热网球菌（ !#