常规杂交反应存在的问题.pdfVIP

中国试剂网 3.9.109 常规杂交反应存在的问题 常规杂交反应由于受到探针解链温度、溶液中靶序列的初始浓度及探针长度 的影响。样品中不同探针所对应的靶序列的拷贝数不尽相同，探针的解链温度也 难以保持一致，这样不同位点的杂交速度并不完全与各自靶序列的拷贝数成正 比，检测结果也就不具有良好的平行性。所以必需选择最理想的条件以尽可能使 正确配对的序列不被遗漏，并使杂交错配降到最低。DNA 双链进行杂交配对时， A:T 间形成2 个氢键而G:C 间形成3 个氢键，所以同样长度的探针由于G+C 含 量的差异而具有不同的解链温度，这样杂交的动力学就会有差别。以TMAC 作 为溶剂可以平衡AT 与GC 的杂交结合能，因而可在一个杂交条件下获得比较理 想的杂交效果[1,2]。例如，Honore 等人将PCR 扩增得到的探针与尼龙膜固定后 在 3M 的TMAC 溶液中与标记的高度简并的寡聚核苷