替莫唑胺联合分子靶向药物抗人脑胶质瘤细胞的体外试验研究.pdfVIP

塑药物与临床2009年5月第9卷第5期ChineseRemcdies＆Clinics，May2009，V01．9，No．5 ·药物研究· 替莫唑胺联合分子靶向药物抗人脑胶质瘤细胞的 体夕卜试验研究 马宁万大海郝解贺李海峰吴恒浩 现今化疗药物种类繁多，但有效率均不理想，本实验应 1．5 MrI’r法检测药物对细胞的杀伤作用：取出96孔板，更换 用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(M1Tr)法比较替莫唑胺含有药物的培养液继续培养至实验终止，不同的用药方案细 (TMZ)联合分子靶向药物西妥昔单抗(c225)对人脑胶质瘤细胞培养总时间相同。每种药物设4个复孔。另设对照组、空白 胞的抑制作用，旨在探索一种有效、新型的化疗方案。 组。72h后每孔加入M，I-I工作液20山，继续培养4h后吸出 1材料和方法 每孔培养液，DMS02001山I溶解。将96孔板振荡10min后，酶 1．1临床资料：16例标本均来自2008年1月至6月山西医联免疫检测仪测定490hm处吸光度(A值)。计算平均细胞抑 科大学第一医院神经外科手术后经病理诊断为胶质瘤的患 者。其中男11例，女5例；年龄12—73岁，平均47岁。按照 WHO中枢神经系统肿瘤分类标准：Ⅱ级4例．Ⅲ级8例。Ⅳ耐药。 级4例。 1．6统计学方法：应用SPsSl5．0统计软件进行数据处理。胶 1．2抗肿瘤药物：TMZ、西妥昔单抗(C225)及TMZ+C225、质瘤细胞对各种用药的敏感性。病理分级、性别、年龄与各种 C225+TMZ两种组合用药。所采用的药物浓度均为血浆峰浓 用药敏感性相关性分析采用r检验，PO．05差异具有统计学 意义。 度。L／mburgCt}推荐的公式计算药物血浆峰浓度PPC(弘g／mJ)= 2结 果 50xD／5000x2x103，D为临床化疗剂量(mg·kg。·d-i)。联合用药 根据两药半数有效浓度IC50来确定实验用药浓度[2】。配药溶2．1化疗药物敏感性比较：药敏结果随用药不同差异有统计 剂均使用灭菌无血清培养液。 1．3主要试剂：完全培养基为达氏修正依氏(DMEM)培养 1 基，含10％d,牛血清。MTr溶液无菌磷酸盐缓冲液(PBS)溶 8．8％。经xz检验，两种药物序贯加药对胶质瘤细胞的敏感性 解，配置成浓度为5mg／ml，过滤除菌，一20℃保存备用。二甲差异无统计学意义(e-．o．05)，但均明显优于单一药物使用(P 基亚砜(DMSO)(Sigma公司)。 0．05)。见表l。 1．4细胞培养：手术中切取新鲜未被电灼肿瘤组织放入 裹1 16例胶质瘤细胞体外药物敏感性结果 DMEM培养液中送实验室。超净台中取出肿瘤组织，无菌PBS 液冲洗3次．去除坏死组织、凝血块后剪成1nlln3大小组织 块。室温下置入0．25％胰蛋白酶中消化10min后，加入血清 r／rain 终止消化。150目灭菌滤网过滤，收集单细胞悬液1000 离心10min，弃上清液。加入含10％dx牛血清的DMEM培养 基，轻轻吹散，细胞计数板计数，调整细胞浓度为lxl06／ml，接 注：‘与联合用药组比较P0．05 种于50Inl培养瓶，置入5％CO：、37oC恒温培养箱中培养。48 2．2病理分级与化疗药物敏感性的关系：按照WHO中枢神 h后更换培养液．胰酶消化贴壁细胞后加入培养液终止消化． 经系统肿瘤分类标准将肿瘤分级．比较不同药物作用以后的 吹打使细胞脱壁并计数，调整为5xl／ml的细胞悬液，每孔