染色体显微切割及新进展.pdfVIP

中国试剂网 3.17.3.3 国外医学遗传学分册　1999 年　第 22 卷　第 3 期 1·13 · 染色体显微切割及新进展 ( ) 湖南医科大学医学遗传国家重点实验室　 长沙 410078 　邓　昊综述　夏家辉审校 提要　染色体显微切割技术是细胞遗传学与分子遗传学相结合的一项桥梁技术。近年来, 该技术在同源基因 的定位和克隆中的价值深受关注。本文结合显微切割的经验, 对其应用和新进展进行了综述。 关键词　染色体显微切割技术; 同源基因; 定位; 克隆 　　完成人类基因组计划的全序列分析, 需要 的同时, 还解决了探针片段受酶切位点限制、文 构建基因组高分辨遗传图谱和物理图谱, 如何 库不全和部分序列高度富集的现象, 是染色体 快速有效地获得染色体区带特异性的序列标签 显微切割领域的又一重大突破。 位点 (ST S) 及表达序列标签 (EST ) , 构建克隆 二、探针池或文库质量的控制 连锁群, 分阶段有序的完成特定区带全序列分 显微切割是一项极其精细的工作, 需要有 析, 染色体显微切割技术显示出无可比拟的优 熟练的技术和严格的防污染措施。通常一个好 越性。该技术自 80 年代初问世以来, 通过与 的文库至少应覆盖 50% 以上所切割的染色体 、微克隆、 、 测序、文库筛选、比 区域, 而且不应存在一些片段在 PCR 过程中的 PCR F ISH DNA 较基因组杂交等分子生物学技术相结合, 在染 高度富集, 才能保证以后研究中能分离较多的 色体病研究与诊断、文库构建、基因定位与克 特异性DNA 片段。污染的来源可以从以下几 隆、以及进化遗传学与肿瘤遗传学等方面的研 个方面进行控制。 究中取得了令人瞩目的成绩, 并以其独特的直 1 实验试剂和用具 接性和实用性保持其在分子生物学领域良好的 实验操作台要保持相对无菌, 实验操作人 应用前景。 员要戴口罩。所用缓冲液应用 0. 22M 的过滤 一、历史回顾 器除菌。切割针可用紫外线照射 30 分钟或干热 1981 年, 德国的欧洲分子生物学实验室 灭菌。尽量使用一次性无菌用品。 ( ) [ 1 ] 2 染色体切割玻片的制备 EM BL Scalenghe 等 切割了果蝇唾液腺多 线期X 染色体第 3 段的几个片段, 通过蛋白酶 虽然切割常规 G 带片段能通过 F ISH 杂交 消化、酚抽提、 酶切进行重组克隆。 1984 得到阳性信号, 甚至使用- 20 ℃固定 3 年的细 EcoR I [ 6 ] 年染色体显微切割应用于小鼠, 1986 年Bates 胞悬液制片也可能有满意的结果 , 但长时间 [ 2 ]